细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]细胞冻存

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 17  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]细胞冻存

skytree[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76459
精华 0
积分 372
帖子 444
信誉分 100
可用分 3026
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
1

发表于 2012-8-7 10:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞冻存


我的CHO细胞按悬液：牛血清：DMSO=6:3:1的比例混合均匀后，分装多管熔封后，先置于4度，然后置于-20度，可是放置20小时后有2/3的管结冰了，而有1/3的管没有结冰，继续-20度24小时，还是没有结冰，请问这是什么原因？这样的细胞还能用吗？能直接放到液氮中吗？
检查过冰箱温度计在-18~-20度，应该没有问题。
顶部
969[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74241
精华 0
积分 429
帖子 518
信誉分 100
可用分 3441
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
2

发表于 2012-8-7 10:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

方案为4度30min，-20度1hours，，-70度2hours，液氮中。
顶部
dragonkilly[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77754
精华 3
积分 596
帖子 699
信誉分 106
可用分 4371
专家分 30
阅读权限 255
注册 2011-11-21
状态 离线
3

发表于 2012-8-7 10:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞于－20度时间不能太长，否则易形成冻晶，对细胞有害，一般放置30分钟至1小时即可，然后于-70度冰箱或于液氮气层放置2－3小时，最后再放入液氮。
顶部
dotaaa[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74170
精华 0
积分 461
帖子 621
信誉分 100
可用分 3880
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态 离线
4

发表于 2012-8-7 10:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的做法是放入4度30分钟，-20度1小时，-70度过夜，然后放入液氮中保存。效果还可以。
顶部
zranqi_1[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77471
精华 0
积分 409
帖子 497
信誉分 100
可用分 3298
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
5

发表于 2012-8-7 10:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

时间大致还可以
其实有一个很关键的步骤
就是要把细胞冻存管放到异丙醇中,这样可以起到缓慢降温的作用
顶部
windy+++[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74130
精华 0
积分 490
帖子 720
信誉分 100
可用分 4343
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-6
状态 离线
6

发表于 2012-8-7 10:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
樓主使用的-20度冰箱是家庭用的吧?
家用冰箱的冷凍庫如果是有除霜功能的,
也就是不會結霜的,
這種冰箱的溫度不是那麼均勻.
因為這種冰箱會為了防止結霜, 會每隔一段時間短暫地加溫,
使得霜能夠融掉.
所以如果你要冷凍的東西很小, 就很容易發生這種現象.
最好避免讓冷凍的小東西直接接觸冰箱內壁,
若是接觸在本就是冷凍好的大物品上應該就會比較好了.

另外, 也有一個可能是你那些冷凍管放得太密集了,
所以會有某些角落的降溫較差.
如果排列鬆散一點就可以避免這樣的問題.
顶部
windy+++[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74130
精华 0
积分 490
帖子 720
信誉分 100
可用分 4343
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-6
状态 离线
7

发表于 2012-8-7 10:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我前段时间冻存的细胞，在-20冰箱30min之后又在-70冰箱放置了24h，之后才又直接偷到液氮之中，从复苏的成活率上看效果不错，建议在投液氮之前于-70冰箱放置一段时间。呵呵呵，献丑了。
顶部
vivian4123[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75243
精华 0
积分 417
帖子 494
信誉分 100
可用分 3331
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
8

发表于 2012-8-7 10:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的一般放在-80度,这里没有液氮
顶部
idea2011[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77656
精华 0
积分 552
帖子 783
信誉分 100
可用分 4726
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
9

发表于 2012-8-7 10:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
放在保暖盒中在-70冰箱放置了24h，之后才又直接偷到液氮之中，可以不用放-20。我前年时间冻存的细胞上星期复苏一点问题都没有，血清：DMSO=9:1，直接与离心后的细胞沉积物混匀即可！
顶部
nn255[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76746
精华 0
积分 652
帖子 1024
信誉分 100
可用分 5877
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
10

发表于 2012-8-7 10:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我家传下的protocol是4度10min，-20度30min，-80度overnight之后转液氮，
-20度我一般不会放超时太多，到了-80度就比较没差，我们放过两三个礼拜的复苏都无碍，据说最长有人放过几个月也没问题(只是据说~)
开始刚作的时候-20度冻30min细胞不结冻的，我这样的细胞复苏并没有问题，最近几批在-20度冻30min后细胞都结冻了，但复苏还是没有问题，
所以感觉上这样的流程是ok的，传下来到自己冻了几批都没问题，细胞复苏率保守估计大约都有80%左右，
周围的人作是有-20度冻过几个钟头的，复苏也没问题，
甚至有周围的人玩过不小心把冻过的细胞从液氮转到-20度的，也能复苏成功，不过伤害率真的很大，看起来存活率不到10%，

我们家冻细胞的medium是5% DMSO+95% complete medium，没新鲜配制，冻在-20度，使用前回温，不过我们的DMSO后来冻完会析出，使用前混匀也不回溶，不知道跟我们后来冻-20度悬液会冻结有没有关系就是了，不过这样试下来似乎也能用，也就继续用着了

不过最好的办法就是楼主亲自复苏一批，然后就能知道能不能用了，
到时候希望回来告诉大家一下结果　：）
顶部
 17  1/2 12››