细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]接种于96孔板的贴壁细胞如何计数才能准确？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 13  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]接种于96孔板的贴壁细胞如何计数才能准确？

qumm1985[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76908
精华 1
积分 475
帖子 546
信誉分 102
可用分 3616
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态 离线
1

发表于 2012-8-7 10:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]接种于96孔板的贴壁细胞如何计数才能准确？

如题：接种于96孔板的贴壁细胞如何计数才能准确？
顶部
tieshazhang[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74105
精华 0
积分 338
帖子 436
信誉分 100
可用分 2916
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-5
状态 离线
2

发表于 2012-8-7 10:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、一般指的是药物的终浓度
2、96孔接种密度在k级，我们一般用每孔100ul，2k细胞/孔，也有用0.5k的，最多不超过5k。细胞接种在孔板中之后，24hr后将原来的培养基弃掉，换成含有终浓度药物的新鲜培养基100ul。
不知道我说的是否对你有帮助
顶部
yapuyapu[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76072
精华 3
积分 574
帖子 695
信誉分 106
可用分 4338
专家分 30
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
3

发表于 2012-8-7 10:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这里的不同浓度药物是加入后的终浓度还是加入前的药物浓度？

我做的是终浓度,即加入后的最终浓度

.一般96孔板细胞应该加入多少量，药物又应该加入多少量呢？
这个也要看你的细胞种类呀,还有加的什么药,
不过,每孔的液体量是100ul

96孔接种密度在k级，我们一般用每孔100ul，2k细胞/孔，也有用0.5k的，最多不超过5k。细胞接种在孔板中之后，24hr后将原来的培养基弃掉，换成含有终浓度药物的新鲜培养基100ul。

细胞密度,我到是赞成,只是后面的一句"换成含有终浓度药物的新鲜培养基100ul"我不是这样,我用的是处理用液,就是低血清的培养液
顶部
qumm1985[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76908
精华 1
积分 475
帖子 546
信誉分 102
可用分 3616
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态 离线
4

发表于 2012-8-7 10:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

文献里也有用不含血清的培养基配药的。

欢迎大侠们来讨论
顶部
ROSE李[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76171
精华 0
积分 466
帖子 611
信誉分 100
可用分 3866
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
5

发表于 2012-8-7 10:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

文献上写的应该是药物的终浓度，配的工作液浓度可以稍大些，加入一定体积到培养板各孔内，使其达到最终浓度。
96孔板每孔的终体积一般在100-200ul，可根据自己需要调整。
不同的细胞有不同的加入量，一般情况下，96孔板一个孔内贴壁细胞长满时约有10的五次方个细胞。但不同细胞贴壁后所占面积差异很大，应根据自己的细胞情况确定接种数量，以保证培养终止时细胞不致过满。
配药所用液体，不同文献有不同方法，有的用完全培养基，有的用无血清的培养基，还有的用生理盐水、PBS、DMSO等等，根据自己药物性质选择。
顶部
04906[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73544
精华 0
积分 599
帖子 858
信誉分 100
可用分 5155
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
6

发表于 2012-8-7 11:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看你是作什么实验？
如果是MTT，一般我们为：

10的4次方（细胞数）/孔
反应总体积200ul/孔

96孔每行12孔，100ul 药物作连续倍比稀释（稀释后的浓度为终浓度的2倍），
再每孔加入细胞100ul。
顶部
c86v[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77054
精华 0
积分 442
帖子 584
信誉分 100
可用分 3741
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
7

发表于 2012-8-7 11:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

96孔每行12孔，100ul 药物作连续倍比稀释（稀释后的浓度为终浓度的2倍），
再每孔加入细胞100ul。

我认为应该只做10孔,因为在孵箱培养时,96孔板周围的孔容易蒸发,造成其中的液体明显少于其他的孔,建议把96孔板周围的孔加入DDH2O
顶部
qumm1985[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76908
精华 1
积分 475
帖子 546
信誉分 102
可用分 3616
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态 离线
8

发表于 2012-8-7 11:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上各位的解释让我对这一步比较明白了。
另有一问，对于贴壁生长的细胞，接种于96孔板后24、48h等如何提取细胞来计数，比如吸掉上清后怎样加胰酶、是否需要离心等，怎样作才能保证将细胞收集完整或计数的比较准确？
顶部
qumm1985[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76908
精华 1
积分 475
帖子 546
信誉分 102
可用分 3616
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态 离线
9

发表于 2012-8-7 11:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请各位高手谈谈有关计数问题的各自经验，我刚开始做实验，好多可能比较容易的地方也不清楚，希望大家不吝指教。
顶部
ending[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76092
精华 0
积分 771
帖子 1242
信誉分 100
可用分 6981
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
10

发表于 2012-8-7 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

接种于96孔板后的细胞一般不再消化离心计数，如果你还想进行上述操作的话，最初接种时需用6孔板。
顶部
 13  1/2 12››