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标题:[求助]细胞消化的问题

8princess8[使用道具]
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发表于 2012-8-7 11:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞消化的问题


我最近刚刚开始养细胞，MCF－7，请教各位：消化一般需要多长时间？用的胰酶浓度多少？还有就是消化后要不要反复吹打，吹打会不会影响细胞的生长？
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2012-8-7 11:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是细胞传代吧，用0.25%的胰酶，镜下观察见细胞收缩即可吸出消化液。
加培养液或Hanks液轻轻吹打后收集。
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-8-7 11:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢指教。消化以后会出现类似沉淀的白色团状和长条状的东西，轻轻吹打似乎没用，不知是什么原因？
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ending[使用道具]
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发表于 2012-8-7 11:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

传代一般用0.25%胰酶消化，用量0.5ml左右，一般能覆盖细胞层即可，消化时间2-3分钟，最好是观察细胞形态变化，当细胞形态收缩聚集时应立即停止消化。有一些细胞因消化不彻底会继续附着在壁上，这时应用移液管吸取细胞液轻轻吹打，用眼观察无贴壁细胞片即可，切不可用力吹打。
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-8-7 11:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢指教。消化以后会出现类似沉淀的白色团状和长条状的东西，轻轻吹打似乎没用，不知是什么原因？
应该是细胞比较密的时候才出现的细胞团啊。再吹打啊。
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黄花菜[使用道具]
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发表于 2012-8-7 11:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉着首先应排除一下消化前培养瓶中的液体是否已浑浊,如果消化前有的话可能是污染了,不用镜下观察就能看出来;如果消化前是透亮的话,消化后有如你说的,它可能是细胞长的太密了,在镜下可看到成团的细胞在一块,你可以试试分开两瓶,一瓶可以用原来的方法,另一瓶稍用点力吹打一下,仅供参考.
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黄花菜[使用道具]
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发表于 2012-8-7 11:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

另消化液消化细胞时还可用0.25%胰酶-0.02%EDTA,0.02%EDTA两种;但含有EDTA时消化完加新鲜培养液前最好应用PBS洗两次,再加培养液继续培养. 消化时间看胰酶的质量定,质量好的最快约50秒,慢的话约需2~3分钟,但最重要的还需在镜下观察,待细胞收缩变圆形时即可,你说的消化后成团有可能是消化不充分而已.
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黄花菜[使用道具]
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发表于 2012-8-7 11:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我吹打时瓶子与桌面成约70-80度,细胞面在上,然后由上往下,由右往左让培养液轻轻吹打细胞面,你可以试试.
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2012-8-7 11:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用含EDTA的消化液是需要细胞离心的吧？不然好像影响贴壁。。。
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2012-8-7 12:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各种细胞消化时间不同，要根据细胞的性质来定
如果能在ATCC上查到该细胞株的话，一般按照其上面推荐的消化试剂即可得到良好的消化效果，时间则需要自己摸，加完消化液后隔一分钟观察一次，镜下观察,待细胞收缩变圆形时即可终止消化。如果置入37°C孵箱中孵育的话，消化效果可得到明显提升。
消化液有0.25%胰酶 和，加0.02%EDTA的0.25%胰酶两种，加入EDTA的胰酶消化能力大适用于贴壁较牢的细胞，反之则选用0.25%胰酶进行消化。
吹打的时间不宜过长，否则会对细胞造成伤害。若想尽量吹散细胞可将吸管与培养瓶（或皿）之间成一定角度，这样打在壁上的力量较大，可将细胞在短时间内吹散。
白色团状和长条状的东西一般是细胞团，经反复吹打后一般都可以散开，若散不开对传代也不会造成太大影响，不过要是进行细胞计数的话最好将其分散开！
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