细胞世界

我在做PC12,但是不是分化的课题,我做的是PD模型
不过我认为,用胰酶应该不会改变它的分化能力吧,我一般是用0.25%的胰酶消化(其中有EDTA),消化下来后用巴斯德管吹打几次,看到没有明显的细胞团就可以了,不知道对你有没有帮助,哈哈

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十分感谢，另请问战友你养pC12细胞使用的培养基和血清是什么样的？

我也在做PC12细胞的PD模型。培养基用Gibco的DMEM,血清用Hyclone的马血清10%,四季青的胎牛血清5%。我也用过Hyclone的DMEM，效果不好，影响贴壁。但马血清还行。我用0.25%的胰酶，没有加EDTA。曾经应急用过别人配的加EDTA的胰酶，效果很好，没什么影响。倒是我的PC12细胞养几个月后形态就有改变，不知大家的情况如何？

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请问有照片吗？形态发生了什么变化？PC12在培养过程中是有可能产生筛选的，进而变为另一亚类PC12！特别是用胰酶消化时！ATCC上介绍的传代方法就不是用胰酶消化，我想问您有没有用多聚lys包被的方法？一直用新瓶子培养吗？

哈哈，这个细胞我正在养，一开始养的也不好，不容易贴壁，现在可健康了^_^ 因为细胞是从其他lab拿来的，所以我用的条件不是atcc上说得那个，我用6％fbs和6％马血清加dmem养，全部都是Gibco的。
培养条件试了很多，最后发现7。5％co2 是最好的。你可以试试。当然5％也可以，但是长得慢，所以我最后选了7。5，一般3天subculture、。

加马血清似乎是因为里面有某种fbs中没有的营养物质，总之一定要加！
用trypsin后PC12会不健康，所以有二个办法。1。每次用完trypsin后1000rpm离心3min。将trypsin吸走。2。每次subcuture时候不用trypsin,和PBS，直接用medium把贴壁的细胞吹下来吹成单个的再长。我用的是后面一种，效果非常好。细胞很健康！

PC12健康与否的判断方法（是我自己总结的）：
没有加NGF时，如果细胞很健康，会长出很短的小轴突，整体圆圆的，很可爱。 当它不健康时，你会发现，1，细胞不易贴壁了，会漂很多。2。细胞会呈现椭圆形，轴突变长（这时的细胞其实状态已经不好了，即使贴壁也不行！）
用说得可能不清楚，我发张pc12的pic给你看。希望对你有所帮助^_^

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谢谢前辈！前辈的细胞的确养的很好！！但是我还有一些小问题，结合我养这个细胞的经历，我用的是5％PAA（我遇到的困难可能和这个有关系？)的胎牛和10％Gibco的马血清（Hyclone的用过不好使），我想问前辈的是您使用medium吹打下细胞有没有什么绝招，我的就是喜欢成团，如果吹打太厉害了又不贴壁了，郁闷。还有就是培养瓶包被的问题，据说在做分化的时候需要用多聚lys包被，您在培养过程中用的培养瓶是Costa的吗，每次需要用多聚lys包被吗？浓度是多少？有人每次都用新瓶培养，我可用不起