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标题:[求助]不死心的我又问关于器官培养的情况

taoshengyijiu[使用道具]
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[求助]不死心的我又问关于器官培养的情况

小弟想做肾脏和肝脏组织的器官培养啊。就是用个切片机把组织切成薄片,然后在培养液中养。我知道神经科用海马组织切成薄片养过,说是可以养个一个多月,然后可以观察一些东西,不知道我的行不行啊?有知道的兄弟姐妹可一定要说两句啊。小弟这里先谢乐。
以前也发过一个类似的帖子,但是回应很少啊,难道真的是天方夜谭吗?
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taoshengyijiu[使用道具]
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现在我试了一下,出现了不少问题啊:
1、组织块如何消化成大量的细胞啊?我用过细胞培养用的胰酶消化,但是好像得到的细胞很少,没有办法啊。是不是可以加点胶原酶可能可以比较完全一点地消化组织块啊?胶原酶是不是很强大的酶啊?小弟没有用过这个酶,所以请高手指点啊。
2、培养液加多少啊,加多了,肝脏组织和肾脏组织会飘在上面,不是贴壁的那种,愁啊。
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园丁##[使用道具]
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看糊涂了,你究竟是做组织片培养还是细胞培养?
为什么又要用酶消化组织了呢?
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taoshengyijiu[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 园丁## 于 2012-8-7 13:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

看糊涂了,你究竟是做组织片培养还是细胞培养?
为什么又要用酶消化组织了呢?

我想看一下组织是不是还活着,打算消化下来用trypan blue染色看看是不是还活着啊。
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66小飞侠[使用道具]
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有点糊涂了。我理解你的意思是把组织切为小片后再养,然后看组织片里的细胞是不是活的。
至于怎么获得足够薄的无菌的组织片,不明白。
1.把组织片放瓶子里很容易飘起来,操作要点建议看看组织块培养的方法。对小块皮肤组织是像摆围棋样吧组织块摆在瓶底,先不加培养基,在孵箱里先放一下,再轻缓的加培养基,量稍微盖过组织块,所有的操作都要轻缓不可晃荡倾斜。
2.你还要消化?是指你培养了一段时间后的组织块再拿出来消化吗?然后看是否有活细胞?
这样的话对于肝脏组织,胶原酶是不错的选择,但比较贵。胶原酶对细胞损伤相对小。可以参照园子里的肝细胞原代培养。胰酶显然是不好掌握的。
3.你既然是看组织块培养后有没有活的细胞,为什么非要它贴着呢?飘着跟贴着不是差不多的生长环境吗?
除非你的意思是要贴着让细胞爬出来。消化贴壁的细胞就是常规操作了。
况且从组织块里爬出的细胞的类型并不一定是你想要的。
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taoshengyijiu[使用道具]
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楼上经典!
感谢。
我的本意是器官培养,或者说是组织块培养也行。以肾脏为例,我想观察150um-500um左右的幼稚的肾脏组织片在体外能否存活,在证明可以存活后,看它能不能继续进行一定程度的分化和增殖;如果这些都有,我再进行我的干预,看看我干预后分化和增殖的变化情况。
听楼上的意思,我觉得也对,漂着就让它漂浮着吧,应该是没有特别大的影响的。
下一步我想买点胶原酶来,毕竟组织是不是活着,除了通过组织切片观察细胞形态外,应该可以通过消化组织后看台盼蓝染色的情况啊,所以我需要消化组织啊,另外,还有没有别的方法证实我的组织还活着啊,肉眼无法看出来啊。
另外,我的课题思路是不是天方夜谭啊,大伙都来说说哈。感谢感谢。
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taoshengyijiu[使用道具]
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今天用我的组织切了个片子,HE染色后,发现“组织自溶”很严重!基本上没有活着的组织。郁闷啊郁闷!怎么办啊?
老外说是可以的啊,不过文章都集中在80、90年代,现在这方面的文章很少。中文的就更少了啊。
是不是没有可行性啊?
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园丁##[使用道具]
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今天用我的组织切了个片子,HE染色后,发现“组织自溶”很严重!基本上没有活着的组织。郁闷啊郁闷!怎么办啊?

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再切得薄点试试。
关键是必须保证组织与培养液的物质交换,还可在切片上添几刀,使培养液更容易透进去。
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taoshengyijiu[使用道具]
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“还可在切片上添几刀”!好主意!!
下次我试一下。dongwp 版主已经帮了我好几次了,真的是感谢。这两天我在好好地研究那几篇老文献,希望有所斩获,呵呵。
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yueban-1147[使用道具]
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搜索到了这篇帖子,深有同感!我做的思路跟楼主差不多,我也始终在怀疑它的科学性,觉得根据不够,后面技术都成熟了,迟迟不敢下手。不知楼主有没有什么新进展?还有你说的***十年代有人做过,文章标题可否发上来看看
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