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标题:[求助]原代腺病毒包装到什么时候收获？

dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2012-8-7 16:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]原代腺病毒包装到什么时候收获？


包装腺病毒已经失败很多次了。这次包装的腺病毒转染后第3、4天有很多的荧光，培养至第6、7天收获了一批，但收获的病毒液感染293没有成功。今天这批已经培养了第12天了，荧光没有到“满天星”那种，但有数片成片的荧光，细胞没有出现较明显的病变效应，没有明显的细胞脱落。不知道现在该不该收获了？
收获早了，可能病毒出毒不完全，或者滴度太低，感染不上；收获的太晚，担心细胞死了。
郁闷啊！！！盼高人指点！～！！
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dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2012-8-7 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

原代培养至14天，包装293细胞的绿色荧光：
是不是可以考虑收获了呢？


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2012-8-7 16:20
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发表于 2012-8-7 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

战友：你好！
关于你的问题我也遇见过，首先做腺病毒包装有个原则就是尽量不要出现野毒，那也就是说你的扩增代数不能多。脂质体包裹转入293不管是否扩增都会出现绿色荧光，一定要在倒置显微镜下看到病理反应－变圆、成团、涨大了之后才能初步确定感染了。接下来就是等，大概到第9天－12天时有大概10％的细胞还贴在瓶底就可以收获了，因为是要裂解细胞获得病毒，所以时间不要太长，等你14天以后再收获的时候好多细胞都自然崩解了，病毒都随着上清倒掉了。还有告诉你扩增不要超过4轮，每轮扩增都会有5％产生野毒的可能性，如果的好不会出现，但是如果为了一味追求数量扩增个十几二十代的，那这个病毒就彻底没法用了，补充了E1的野生病毒会疯狂的感染细胞，让你的细胞全部死翘翘。再补充一下，第一轮扩增的时候如果出现病理反应，那么不管多么低的收获，对于第二轮感染扩增都是足够了的。个人愚见。祝实验顺利^_^！
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dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2012-8-7 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
首先谢谢楼上的的关心和祝愿。下图为当时的光镜照片，不知是否有hsjdadan 兄所说的病理反应－变圆、成团。

[ 本帖最后由 dongdongqiang 于 2012-8-7 16:22 编辑 ]


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发表于 2012-8-7 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

继续等吧，这样还不能算是病理反映的。
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发表于 2012-8-7 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞密度已经很高了，如果再等的话，细胞生长和包装腺病毒的效果可能不会太好哦。因为周围已经有了成片的荧光，应该已经有了一定的病毒。可不可以先收获， 再拿去感染状态较好的293细胞呢？
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发表于 2012-8-7 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议首次转染时要控制好细胞密度和转染后则要控制好293细胞的生长速度。上图cpe还没有完全。
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发表于 2012-8-7 16:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

转染时候我们将293细胞的密度控制在70～80％。但请问，转染后如何控制细胞的生长速度呢？
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2012-8-7 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

收获了上次的包装细胞；不过拿来感染293细胞，但是当时293细胞的状态似乎不太好，24小时没有绿色荧光。准备将上次收获的病毒上清，再次感染状态较好的293细胞，希望可以有结果出来。给自己加油，继续等！
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dotaaa[使用道具]
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发表于 2012-8-7 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你用的是那个腺病毒系统，转染后可以降低血清浓度来控制293的生长，同时收毒不能过早，要有耐心。
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