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标题:[求助]支原体污染,该怎么办?

33号[使用道具]
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[求助]支原体污染,该怎么办?


我的细胞养了快一个月了,才刚刚有贴壁的迹象。从显微镜下面看很正常,除了细胞漂浮以外,没有什么细菌真菌污染的痕迹,所以怀疑是支原体的污染。细胞来之不易,我不想全部扔掉,但是如果是支原体的污染,我该如何补救呢?听说红霉素或者四环素很好用,却不知道应该配成多大浓度的。有一点我很担心:细胞的活性本来就不是很好,加这样强的抗生素会不会对细胞有损伤呢?不知各位有没有这方面的经验,指导一下,小妹不胜感激!
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nn255[使用道具]
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上海晶美生物公司有Primocin系列,价格较贵,你可尝试。
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kulee[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 nn255 于 2012-8-11 14:59 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

上海晶美生物公司有Primocin系列,价格较贵,你可尝试。

楼上,多少钱?
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nn255[使用道具]
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回复 #3 kulee 的帖子

我买了一个大瓶的,也可有10*1小瓶的,

我买了人民币2600/瓶,买贵了
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avi317[使用道具]
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不知道你养的什么细胞,我想你需要考虑以下几个方面的因素:
1.所用的培养皿或培养瓶,有的实验室用进口的细菌培养皿培养悬浮细胞,这些皿只有在包装上才能区分,如过用错了的话,即使很容易贴的细胞也很难贴壁存活。
2.如果用的是旧培养瓶的话,可以考虑用进口的塑料一次性培养瓶,甚至可以在培养之前将培养瓶用胶原,明教或者FN等包被以促进细胞贴壁。
3.掌握所养细胞的标准培养方法,不能想当然。不是所有的细胞都可以用相同的培养方法培养,有时候血清的浓度,消化液的种类,浓度,消化时间长短,吹打的力度,培养液中其他的添加成分,甚至有些细胞需要特殊的饲养层,这些因素在细胞贴壁不良的情况下都需要考虑。
4.细胞状态不好即使推测有污染,也不要轻易加抗生素,即使将来细胞挽救过来了,加抗生素的过程很可能会影响细胞的某些性质,导致实验结果的真实性和重复性差,由此得到的结果可能会使实验走向错误的道路。
5.不要轻易作出支原体污染的结论,除非能证实这一点。
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zhenxin[使用道具]
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我根据自己的经历,非常赞同底楼的建议,即使用了抗生素并且敏感有效的话,也不能确保被挽回细胞的性质.
建议慎用抗生素.
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lagua123[使用道具]
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经常培养细胞的实验室,应该定期诊断培养的细胞是否遭到支原体污染。因为细菌污染也好,真菌污染也好,这些都是肉眼或者显微镜下可见的,比较容易处理。而支援体污染无法根据显微镜下的细胞形态作出判断,是一种潜在的、对细胞和实验结果影响很大的因素。建立快速诊断支原体污染的方法很简单,现在不少公司都有快速诊断试剂盒子,每个试剂盒可以用五十次,几个小时就可以出结果。
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HP007[使用道具]
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十分感谢各位前辈!虽然现在细胞的状态还不是很好,我还没有确定是不是支原体的污染,所以我还是没敢随便用抗生素,打算做一个培养试试。

我养的细胞是IPE细胞,贴壁生长。据说这种细胞十分的脆弱,成活率很低。但是这么长的时间才贴壁还是前所未有的,而且本来很分散的细胞会有聚集成团的现象,这些都与支原体污染很相似。如果是支原体污染的话,我有几处怀疑的地方,大家可以作个借鉴:
1.试剂方面:
使用的培养基是进口的粉末培养基,就是直接加水(我们实验室用的是三蒸水)、调pH值、过滤后就能用的那种,但是因为要经过0.22的滤膜过滤,所以水没有经过高压灭菌,而0.22的滤膜是不能阻止支原体通过的,所以这一点让我非常怀疑;
胰酶是买的现成的,不存在配制时污染的问题;
血清是国产的优级胎牛血清,不需灭活,不知道信不信的过?而且加到培养基之前也用滤膜过滤了,
2.实验器材方面,培养瓶是一次性塑料的,而且是经过胶原处理的,其它器材也是经过高压灭菌的,估计应该没有什么问题。
3.实验操作方面:
这也是我怀疑的地方,虽然操作时该戴的都戴了,但是还是不能保证严格的无菌。比如手、袖口等。
4.材料的来源:
取材过程中的支原体污染。

以上是我能想到的污染途径,也许还有没有想到的,希望各位前辈指点。
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131415[使用道具]
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9
 
介绍一价廉物美,确实有效方法。快给我加分!

去医院买一瓶静脉滴注用的”环丙沙星注射液“,国产的很便宜,在超净台内打开,可直接往培养瓶里加,混匀,终浓度为10ug/ml,细胞连续用药两周,即OK。也可试20,10,5,高中低三个浓度,慎重些。本实验室多人试过,效果很好,且一瓶静脉滴注用的”环丙沙星注射液“,稀释量很大,能用于大量大量的细胞,经济实惠,最穷的人也用的起。
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eric930[使用道具]
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一般除支原体用0.1的膜,最好进口的,如Millipore的,另外小批量可以用一次性培养皿
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