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标题:[求助]细胞接种到培养板后中间老是长不满

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发表于 2012-8-11 15:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞接种到培养板后中间老是长不满


我把细胞消化接种到24孔板之后，已经四天了，老是每孔的中间部分长不满，每天换液时都用PBS 清洗，第二天换液时都出现同样的情况，每孔的边缘长的很好，中央大量死细胞，我也不知道是什么原因，请各位高手仁兄给把把脉，先谢过！
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2012-8-11 15:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个在前面已经有过相关的贴子了，建议搜索一下。

是中央长不满，还是中央有和边缘相同密度的细胞，但是大部分都是死细胞？如果是前者，也许不是技术问题，而是物理问题了。

我是选择孔内铺盖玻片，在玻片上种植。每次换液都用PBS洗，必要的步骤吗？另外，也有可能和细胞种类有关或者和培养液有关？

没有禁忌的话，不妨直接描述细胞种类和你的操作过程。
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2012-8-11 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我把细胞消化接种到24孔板之后，已经四天了，老是每孔的中间部分长不满，每天换液时都用PBS 清洗，第二天换液时都出现同样的情况，每孔的边缘长的很好，中央大量死细胞，我也不知道是什么原因，请各位高手仁兄给把把脉，先谢过！

————————————————————————————————————————————————————————————————

呵呵，
我想你的培养液可能加的太少了。
由于表面张力的作用，培养板的边缘液体会向上走，造成培养液面呈现一个凹面（就像量筒的液体凹面一样），中央的细胞正好在凹面的最低处，培养液少，细胞的营养不够，甚至干涸掉，空气中的氧气也会造成损伤，即使有增值过来的细胞也会死掉。
估计你的培养液里可能有贵重的“银子”（因子）啊，想少用点吧，结果就…… ：）
另外，检查一下培养箱底部的水是否少了，如果少了，箱内的空气湿度不够，会造成培养液挥发加快，这样即使刚加的液体不少，过一段时间，由于蒸发，液体量会减少，造成中央干涸。并且这样会改变了培养液的成分浓度，造成渗透压过高。

如果我分析对了，告诉我一声好吗？
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huifeng0516[使用道具]
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发表于 2012-8-11 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位的分析，我每孔加1ml，应该不会太少吧，今天去看时，有的孔中已经完全长满，但有的孔仍然出现前述的情况，中央是大量死细胞啊，周边的细胞生长良好。我当时也考虑是否是培养箱底部水分不够，所以昨天换液时加了水，哎，今天还是老样子。
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huifeng0516[使用道具]
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发表于 2012-8-11 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是HT－29细胞，现在用的是RPMI1640,现在只是试验准备阶段，因为每孔中细胞老是长不满，所以下一步试验也没法进行。急啊！！
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2012-8-11 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
换液，清洗动作一定要轻柔
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ero11[使用道具]
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发表于 2012-8-11 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

24孔板是新的吗？质量如何？有时培养皿质量不好造成生长不均匀的〉
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49888[使用道具]
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发表于 2012-8-11 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

也担心是否是培养板的问题，今天已经换了新的，下午做的，傍晚去看时细胞都贴壁了，不知明天状况如何？阿门！
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发表于 2012-8-11 15:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
呵呵
为什么换液时要用PBS洗呢？
没必要洗的。
我估计你是洗的时候将细胞吹动了，有时候细胞贴得不是很牢，换液时一定要小心，轻轻将旧培养基吸出，不能吹打；
加新培养基时也要注意，沿着孔璧缓缓加入，不要直接对着孔中央加进去。
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eric930[使用道具]
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发表于 2012-8-11 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
个人经验认为这是物理问题:
24孔版小,细胞接种进去后是很难摇均匀的,结果导致细胞重贴壁后呈现四周密中间稀的状况.
至于中间较多死细胞,如果是悬浮状的话,也一样是物理问题.
接种后比较粗暴的碰撞,似乎对摇均匀细胞有一定效果.
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