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标题:[求助]流式－乙醇固定遇到的问题？

wood533[使用道具]
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发表于 2012-8-13 10:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]流式－乙醇固定遇到的问题？


1.我把单细胞悬液做好固定于70％乙醇中，马上两个星期，因为流式细胞仪坏了，修好时间也不确定，那么对下次做细胞DNA分析会有很大影响么？那么现在是不是应该离心出悬液后低温保存呢？还是继续4度保存在乙醇中？
2.细胞悬液1X106细胞/ml，分别需要加入RNA酶多少浓度，多少体积？Triton X－100多少浓度，多少体积？PI染液又是多少多少浓度，多少体积？因为这里的PI不是把这些放在一起的，而是分开的配制？
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发表于 2012-8-13 10:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1：没有关系的，细胞用70％乙醇固定后，4度可以放置几周的，不会影响你后续的DNA分析
2：RNA酶终浓度50ug/ml. PI终浓度100ug/ml,Triton X－100可以不加得呀，我们做细胞周期分析的时候不需要加Triton X－100
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-8-13 10:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Triton X－100加上去是为了破膜作用，然后PI染液才能上色吧？
那不加Triton X－100对实验结果没有影响嘛？
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-8-13 10:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有些文献提到用深低温保存，这样可以放置一年时间？
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utt0989[使用道具]
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发表于 2012-8-13 10:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该是没什么问题的，请放心！^_^
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发表于 2012-8-13 10:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不用加Triton X－100的呢。你加70％乙醇固定，就可以将细胞膜打通，PI染液就能上色了把。
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发表于 2012-8-13 10:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

10×PI(500ug/ml)配制方法：
5mg PI
0.1ml Triton X-100
3.7mg EDTA
10ml PBS
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阿司匹林[使用道具]
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发表于 2012-8-13 10:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不用加Triton X－100的呢。你加70％乙醇固定，就可以将细胞膜打通，PI染液就能上色了把。

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乙醇固定可以有破膜作用？作用效果如何？据我所知，乙醇主要靠其对脂类的作用对膜有一定的影响，但是并不能取代Triton X-100的破膜作用！
能给出相应文献吗？

我们实验室的PI配方如上，都是需要Triton X-100来破膜的！
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阿司匹林[使用道具]
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发表于 2012-8-13 10:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这几天忙，楼主可以试试两种方法对比！
比如将细胞用凋亡诱导剂诱导后，培养一定时间，然后用加/不加Triton X-100的做对照，观察其对凋亡率的结果的影响，可以得知Triton在其中的作用！一个早上就可以出结果，试验结果就是证据，除此之外，没有权威！

好运！
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