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标题:[求助]如何冷冻细胞

ququer787[使用道具]
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发表于 2012-8-13 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]如何冷冻细胞


我准备冷冻分离的白细胞.请问冷冻液用哪种好?
(1) 10%DMSO+90%FBS
(2) 10%DMSO+10%FBS+80%1640
(3) 20%DMSO+20%FBS+60%1640
另外,白细胞复苏后是不是活力很差?谢谢!
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-8-13 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
2) 10%DMSO+10%FBS+80%1640。

——————————————

会影响细胞的功能。
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乌贼老弟[使用道具]
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发表于 2012-8-13 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我建议
(1) 10%DMSO+90%FBS
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dog002[使用道具]
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发表于 2012-8-13 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

第一种肯定行不通。因为冻存液其实就是加入少量ＤＭＳＯ的细胞完全培养液。第二种和第三种的区别除了ＦＢＳ不同外，ＤＭＳＯ的比例也不同。我的感觉是ＦＢＳ一般１０％就可以，除非你的细胞有特殊要求。而ＤＭＳＯ的量，就我目前了解的细胞培养方面的知识，一般都是按照１：９比例加入至全培养液中。
所以个人觉得第二种方案是可取的。
仅供参考！
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HP007[使用道具]
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发表于 2012-8-13 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室冻细胞是用的第一种方案，效果挺好的，要注意慢冻快速复苏。
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发表于 2012-8-13 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有充足的经费及血清者，选择：(1) 10%DMSO+90%FBS
我相信一般的同志都采用：(2) 10%DMSO+10%FBS+80%1640
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vera+[使用道具]
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发表于 2012-8-13 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用第二种方案，效果挺好的，简单方便。
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skytree[使用道具]
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发表于 2012-8-13 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

感觉楼上的血清含量略低了。应该至少用到20%的血清吧。
我们实验室可以用到50-60%甚至更高。这样比较好一些。
当然注意的原则是慢冻速融了。我们一般处理完后先放4度半个小时，再放-20度半个小时，再在液氮罐口放置半个小时，然后沉下去。这样冻存我们再复苏时一般没出现什么问题，当然复苏时要注意别污染了。
至于细胞记数什么的一般就不需要了。

细胞冻存这样的问题在DXY搜索很容易就找到方法的，建议你求助前应该先检索一下，应该能有不少的收获并节省时间。
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-8-13 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想MSO不能超过10%，FBS不能低于20%，FBS至于多高比较高，我们实验室是30%，还不错。
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-8-13 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
第一种肯定行不通。因为冻存液其实就是加入少量ＤＭＳＯ的细胞完全培养液。第二种和第三种的区别除了ＦＢＳ不同外，ＤＭＳＯ的比例也不同。我的感觉是ＦＢＳ一般１０％就可以，除非你的细胞有特殊要求。而ＤＭＳＯ的量，就我目前了解的细胞培养方面的知识，一般都是按照１：９比例加入至全培养液中。
所以个人觉得第二种方案是可取的。
仅供参考！

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第一种方案的可行性是勿庸置疑的，我已经用了很久了，效果还是能达到要求的。血清能促进冷冻后细胞的存活，所以50％以上，甚至纯血清是最好（不同细胞株应该有差异，不过一般来讲血清浓度是越高越好的）。
第一种方案最大的问题是成本，普通学校实验室基本上不会使用。而如果是生产的话，我相信1号方案应该是不错的。
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