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标题:[求助]凋亡途径的检测方法

jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-8-14 10:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]凋亡途径的检测方法

各位大侠：

小女子目前做黄酮抑制双氧水引起的细胞凋亡的研究。凋亡的检测已经做完了，下一步要做凋亡途径的分析。我查了一些文献，发现双氧水引起的细胞凋亡主要是通过线粒体起作用的。

请问与线粒体有关的凋亡途径具体有哪几条？应该如何检测？抗氧化剂一般通过哪条途经起作用？请各位高手指教！多谢多谢！！
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baidukk[使用道具]
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发表于 2012-8-14 10:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你可以检测线粒体电位的改变，具体的方法你可以查一下，我记得好象晶美公司有试剂盒卖，细胞版好象也有战友做，偶不在学校，手头没有相关资料，你可以在这里搜一下。
关于与线粒体有关的凋亡途径，偶记得偶的这篇综述里有，偶正好放在网络硬盘里了，你可以看看，再联系一下具体途径看有没有其他方法检测，
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-8-14 10:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
多谢多谢！
我查了一些文献，发现目前与氧化有关的细胞凋亡的研究好像集中在bcl-2家族，JNK途径，线粒体的膜电位及通透性转变孔的变化，细胞色素c释放，p53等的检测上。其中与抗氧化剂有关的有哪些？
我想检测bcl-2家族，但我们老板觉得别人做得已经很多了，再做也没什么意义，大家有什么好的思路？请不吝赐教！多谢多谢！
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HP007[使用道具]
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发表于 2012-8-14 10:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

线粒体途径：
1，细胞应激反应或凋亡信号都能引起线粒体细胞色素c释放，细胞色素c能与Apaf-1、caspase-9前体、ATP/dATP形成凋亡体（apoptosome），然后召集并激活caspase-3，进而引发caspases级联反应，导致细胞凋亡。

2，线粒体也可以释放AIF（凋亡诱导应子）后者可以直接活化下游caspases，甚至直接裂解某些选择性底物，迅速诱导核凋亡。

3，现在有文献发现Caspases－1的活化早于线粒体膜电位改变，认为凋亡诱导剂使caspases活化->膜电位改变->膜间蛋白释放——>caspases形成正反馈。（只记得作者是Susin，是关于Fas诱导的凋亡。）

双氧水诱导细胞凋亡的文章很多，应该也有机制研究，可以查到。至于要验证也应该比较简单，相关途径的抑制剂做对照。

只能提供这些信息，我认为其他的就是该你自己慢慢查找，学习的东西。这也就是你自己学习提高的机会！

好运！
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-8-14 10:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Caspases在现在是热门话题，可能你们老板会有兴趣。
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2012-8-14 10:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

bcl-2有两种差异剪接体啊,在细胞凋亡终局有王权相反的作用,一种促进凋亡,一种诱导凋亡,有兴趣的化可以找一下相关的文献.
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eric930[使用道具]
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发表于 2012-8-14 10:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
bcl-2有两种差异剪接体啊,在细胞凋亡终局有王权相反的作用,一种促进凋亡,一种诱导凋亡,有兴趣的化可以找一下相关的文献.

————————————————————————————————————————————————————————————————

bcl-2 family 的成员很多，功能除了促进/抑制凋亡以外，还参与其他细胞生物学进程。我自己认为，一开始不要涉及太多内容，首先力保试验前期结果确实，有效，然后再做深入研究，这都要根据自己的试验时间，经费，实验室设备，技术等来决定！千万别铺得太开，结果收不了尾，还得造假过关！切记，切记！

好运！
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-8-14 10:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢各位的帮助！
我现在基本确定要检测caspase-9或Apaf-1、Smac、Endo G、AIF，由于实验经费的原因，不能用试剂盒，只能用免疫细胞化学的方法检测。有没有人做过相关的实验，能不能告诉我详细的步骤？多谢多谢！
另外，400umol/L双氧水一般在几个小时能引起以上蛋白的变化？此时细胞的形态大约是怎样的？是不是已经全部变圆脱落，还是仍然贴壁？如果是前者是不是要用细胞涂片，而后者用爬片？
请各位大侠赐教！多谢多谢！
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-8-14 10:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

“用免疫细胞化学的方法检测”如何分析结果？比较阳性的多少？强度？
感觉应该是做Westen Blot更易于分析。
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jrwyyplt[使用道具]
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 小中大

的确是Westen Blot更好一些，但是我们实验室没有相应的仪器，而且经费有限，只能用用免疫细胞化学的方法检测了，还请大侠指教！多谢！！
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