细胞世界

各位战友：
我要把构建好的pCDNA3.1重组质粒转进Hela细胞，打算做稳定表达，目前正在摸索G418的筛选浓度，有几点疑惑，请教大家，请赐教。
1 我打算在24孔板做转染，转染之后按照说明书上说的要做1：10传代，这个1：10的意思是不是把转染后的1孔细胞消化之后铺到10个孔中?
2因为我只有24孔的板，没有其他的板，那么在传代之后24h之后加入G418筛选，假如克隆出现了，该怎么办呢？
3 还有这个1：10传代，能不能传代培养瓶中呢，不想浪费板了，假如24孔板的1孔能传几个小的培养瓶中呢？
三个问题请大家赐教，谢谢了！

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我也转过Hela细胞。脂质体介导pcDNA与pALTER共转染Hela细胞。
1、我是转染后24小时，直接用胰酶消化Hela细胞，然后转移进大板，再24小时后加G418加压筛选。我不知道1：10传代是为了什么，是不是防止细胞密度过大呢？我的认为：比方说消化后加入2ml1640吹打，然后取0.2ml传代。你可以分3个梯度：0.2ml 、0.6ml、1.2ml。个人感觉无须1：10传代，因为加入脂质体后细胞死亡太多，直接传代就可以了。
2、只有24孔板的话比较难办。因为筛选后需要套取细胞克隆。我用的细胞培养板，忘了什么公司的了。65一包，每包10个。如果用24孔板的话，克隆出现后套取很难，绝对需要技术含量了，呵呵。再说了，24孔板太小了，面积比9cm培养板差的太远。
3、传代培养瓶的话，怎么套取细胞呢？我只会用细胞培养板套取，培养瓶的话就不知道了。24孔板转染后消化至大板，筛选出现单克隆后套取至6孔板，长满后消化至培养瓶。我是这么个程序。如果用24孔板转培养瓶的话，我感觉很难。因为一个克隆也就那么10几最多几十个细胞，转到培养瓶能成个什么密度？！

个人认为，G418如此贵的玩意咱都用了，就别省那几个板的钱了吧。

个人愚见，仅供参考。

我用的是INVITROGEN的脂质体法转染，但是说明书上说转染之后24h传代后按1：10或者更高的比例铺板，我想也是有一定的道理的，如果比例低了，那么很有可能没有转进去的细胞很快就可以覆盖转染进去的细胞，毕竟转染进去的细胞负荷大些，生长缓慢。
对了，你做的G418的浓度范围是多少，我正在做，今天是第7天了，发现600－800UG/ML细胞死亡较大，400－500的也有大量的死亡，我想在做几天，等到了十天以后在确定筛选浓度。我的G418是从华美买的是进口分装的。
大家谈一下Hela细胞的G418浓度的范围是多少。

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0.4mg/ml，我用的是这个浓度。
楼上的战友说浓度从0.2mg/ml到0.5mg/ml，我怎么感觉这个浓度是不是应该从大到小才对呢？最高可以到0.8mg/ml，然后用低浓度维持。
个人意见。

转染细胞别心急哈，尤其是最后绝望了的时候，说不定有那么个细胞你没看到，慢慢就长出克隆了。