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标题:[求助]求助细胞凋亡？

66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-8-16 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]求助细胞凋亡？

我用OX-LDL 诱导细胞凋亡，用100ug/ml的浓度, 但是贴壁细胞却大部分脱落了，细胞也变圆形了，做了几次都是这样！我没见过凋亡细胞是什么样的，请问这是怎么回事啊？
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utt0989[使用道具]
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发表于 2012-8-16 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

凋亡细胞应该是悬浮起来的,你应该作染色进一步看一下.
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-8-16 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

但是细胞大部分都脱落了，就象被胰酶消化过一样，如果是凋亡应该不会有这么多吧？
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-8-16 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的细胞应该大部分都死了，如果浓度大，药效强是有可能的
凋亡细胞边缘粗糙，会有凋亡小体
你搜一下以前有关于凋亡细胞图片的帖子
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2012-8-16 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

既然这样，可以做一个梯度，把浓度减小，再做调亡检测
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-8-16 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位的提醒，我决定试试看。
但是还有个问题是我看到的这些漂浮圆形的细胞膜都很完整光滑，也没见到什么细胞碎片之类。如果是凋亡细胞，未染色的情况下，在显微镜下看应该是什么形态呢？
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发表于 2012-8-16 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

普通的显微镜不能观察到apo的,象你说的细胞大部分已脱落,我觉得是细胞已经坏死了,也就是说你的毒物剂量和染度时间有问题,需要调整.建议你做个mtt,先确定好染毒时间和浓度.做apo所使用的剂量和时间是对细胞活力没有太大影响的才可以使用.有关mtt的实验方法可以搜索的到,你可以参考文献多挑一些浓度和时间段,根据时间结果再最终确定自己的染毒时间和浓度.好运!
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发表于 2012-8-16 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
在显微镜下如果呈现细胞大部分脱落,那么细胞的损伤不只是凋亡,大部分都已死亡.可以取细胞培养基测LDH释放量初步判断.另外,通过普通显微镜较难从形态学方面判断其是否凋亡.
认同楼上的建议,设不同浓度时间梯度,结合自己实验室条件多途径判断.
A通过MTT法测细胞的活力,
B形态学方面可以从下面几方面:
1甲基绿派诺宁染色法光学显微镜下凋亡的细胞细胞核固缩呈绿色或绿篮着染,胞质呈红紫色着色,坏死细胞只有固缩细胞核呈绿色着染.
2荧光显微镜丫啶橙染色法或Hoechst33258染色法等,
3采用流式细胞仪PI染色法Hoechst-PI染色法等.
4.透射电镜观察细胞超微结构
C生物化学研究方法,最简单的是琼脂糖凝胶电泳分析,凋亡细胞呈梯状条带,坏死细胞呈膜状条带.
D分子生物学研究方法从基因水平进行探讨.
E末端标记法TUNEL法等
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c86v[使用道具]
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发表于 2012-8-16 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得在显微镜下有时是可以看到的，大家看看我拍的，那是凋亡小体


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langlang[使用道具]
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发表于 2012-8-16 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想问一下，诱导凋亡的药物用量的选择。已经做过MTT，72h,IC50是50UG/ML(中药提取物），凋亡的药物用量，时间怎么选？
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