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标题:[求助]怎样才能避免3T3L1前脂肪细胞分化过程中的细胞漂浮

Ao7[使用道具]
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发表于 2012-8-18 10:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]怎样才能避免3T3L1前脂肪细胞分化过程中的细胞漂浮


本人在做3T3L1前脂肪细胞分化过程中，当加了IBMX(0.5mM)+胰岛素(10ug/ml)+地塞米松(0.25uM/L)后，细胞分化的比较好，在加分化液后的第4天就开始出现脂滴，在第8天后有90%以上的细胞中出现明显的脂滴，但是从加分化液后的第2天起，培养液中就开始出现大量的悬浮细胞，每次换液时这些悬浮的细胞就丢失了，到第8天后培养瓶中贴壁的细胞很少啦，如何才能避免这些细胞的悬浮啊！是所加分化液浓度问题（如胰岛素浓度）还是其它原因啊？请各位高手指教。
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发表于 2012-8-18 10:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上的兄弟，我也是啊 ，郁闷哦。诱导后细胞好容易就脱落的，我看操作再轻一些会不会好点，等待中。。。

顶上去
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发表于 2012-8-20 13:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我前一阵子都很正常,就是这阵子也出现这种情况,应该是地塞米松的影响,可以考虑用大一点的表面皿.
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发表于 2012-8-20 13:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位！我现在的脂肪细胞培养的不错，细胞分化后漂浮的很少啦！
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发表于 2012-8-20 13:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的细胞也开始分化了，不过还是有很多脱落的，细胞大部分都回缩到孔中央，现在是中央的细胞密密麻麻很难观察，周边的细胞稀少，但可以清楚的观察到分化的细胞。
请问你的问题是怎么解决的呢？谢谢！
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发表于 2012-8-20 13:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

解决问题的办法有二个：
1、诱导前细胞状态要好，培养基中悬浮的死细胞少
2、诱导后换加培养基时一定要小心，可不用PBS洗，培养基应该沿着培养板孔侧壁缓慢流入，避免直接打到贴壁细胞上。
以上为个人一点小经验，仅供参考！
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发表于 2012-8-20 13:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是的阿。我就是很小心的 ，换液都是一滴一滴慢慢滴进去的，已经够轻了吧：（
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发表于 2012-8-20 13:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
分化：
1.细胞的来源一定要好。3T3L1细胞株容易蜕化，一旦发现细胞的形态不好一定要换新的细胞株，最好一年从atcc购买至少一次，细胞的好坏是决定后面
分化、漂浮等等一切的关键，本人的细胞都是从atcc购买；
2.1：8传代后三天即可长到80%以再次传代，传代后4天细胞可以融合，再让其融合两天后即可以分化，时间过久细胞会漂浮或层叠，不利于分化；没有融合的过程，细胞没有退出快速生长期也不利于分化；
3.分化之前可以将细胞用hank‘s液轻轻洗一下，洗去漂浮的细胞，然后再加分化液；
4.已经开始分化的细胞每次换液时候小心，不要去振荡或摇晃瓶子，可以将瓶子竖立起来，将培养液加在瓶子上没有贴细胞的一面，这样不会将细胞吹打起来；
5.细胞分化过程中换液要及时，按两天一次换液，分化后第8天有90%以上的细胞中有脂滴，要及时使用，不然时间稍长分化好的细胞就漂浮起来啦！再想让它贴壁就困难啦！

对不起！前一段时间本人很忙很少上网，所以没有及时回答上面战友的问题，很抱歉！现在我会经常上来的！希望大家一起交流养细胞的心得！唉！做实验啊，咱们都是苦孩子！
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-8-20 13:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是阿 尤其是做细胞实验真是苦上加苦！
对于细胞的好坏，我也有深刻的感受。细胞状态不好怎么分化都不行，会很容易导致细胞漂起或死亡。我现在的细胞形态已经都不太行了，也没办法，硬着头皮做阿。
楼上的战友用的浓度和我的一样，效果还不错。

另外，用培养瓶培养细胞分化的效果要远远好于培养板。
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 小中大
请问一下，你的3T3是通过什么方法买到的？大概多少钱？我的3T3好像也不太行了。
还有如果在瓶子中分化会更好吗？为什么？那样的话后面处理和收集细胞会不会很麻烦？谢谢！！
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