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标题:[求助]大家看我的DMEM这样配可不可以？

avi317[使用道具]
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发表于 2012-8-22 13:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]大家看我的DMEM这样配可不可以？


我的DMEM培养基是这样配的：13.4g培养基（一包）＋3.7gNaHCO3＋2.38gHEPES,定容至1L。但实验中我发现，这样配的培养基置于5％CO2培养箱时没多久就变成黄色（骗酸），细胞也不怎么生长和增殖，我想可能是培养基在5％CO2条件下的缓冲能力不够，我想问一下高手：可不可以不加HEPES？只是加3.7g/LNaHCO3?让其偏碱，以便在5%CO2下有足够的缓冲能力？大家是怎么配的啊？
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发表于 2012-8-22 13:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

HEPES不用加的。不过加了以后应该是缓冲能力更好，你的情况实在有点想不通啊。要不你放一点没细胞的培养液进去看看吧。
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发表于 2012-8-22 13:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最好还是调一下pH的 你 有没有 最好在7.1－7.3之间
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junjie05[使用道具]
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发表于 2012-8-22 13:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

HEPES的水溶液本身是偏酸的，假如不加HEPES，你的配制方法是对的，加了HEPES后必须用NaOH调pH。
方法：
1.可以先配制1mol/L的HEPES溶液，用NaOH调pH到7.2再加到培养液中。
2.在培养液中加HEPES后立即用NaOH调pH到7.2。
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HP007[使用道具]
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发表于 2012-8-22 13:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

把NaHCO3的量降到2.0,HEPES的量降到1.19.因为过多的HEPES对细胞具有毒性.
我们的培养基是Gibco公司的.培方如下:
我培养基是:13.4g培养基（一包）＋2.0g NaHCO3＋1.19g HEPES
结果还行,PH值在7.3左右,神经细胞也可以长.
仅供参考,第一次配培养基最好要测一下ph值.祝
好运!
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avi317[使用道具]
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发表于 2012-8-22 13:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
HEPES的水溶液本身是偏酸的，假如不加HEPES，你的配制方法是对的，加了HEPES后必须用NaOH调pH。
方法：
1.可以先配制1mol/L的HEPES溶液，用NaOH调pH到7.2再加到培养液中。
2.在培养液中加HEPES后立即用NaOH调pH到7.2。

————————————————————————————————————————————————————————————————

加了3.7gNaHCO3后pH在8.0以上，加2.38gHEPESpH会降低到7.2左右，但这样的培养基好像在5%CO2下缓冲能力不够，显示为酸性
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avi317[使用道具]
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发表于 2012-8-22 13:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想问一下是不是只加3.7gNaHCO3就可以了？
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avi317[使用道具]
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发表于 2012-8-22 13:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
HEPES不用加的。不过加了以后应该是缓冲能力更好，你的情况实在有点想不通啊。要不你放一点没细胞的培养液进去看看吧。

______________________________________________________________________________________________________________

只加NaHCO3则起始pH会偏高，加了HEPES后起始pH正好（7.2），可是在CO2培养箱里缓冲能力有限，会偏酸。加空白不含细胞的培养基，过夜后由桃红色变为橙黄色
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-8-22 17:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加了3.7gNaHCO3后pH在8.0以上，加2.38gHEPESpH会降低到7.2左右，但这样的培养基好像在5%CO2下缓冲能力不够，显示为酸性

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"加了3.7gNaHCO3后pH在8.0以上"是个假象，培养基的配方是按在5%CO2环境维持pH在7.2，所以如果把配好的培养基在5%CO2环境平衡后，pH应该在7.2。再加入酸性溶液HEPES，当然就显示为酸性，所以必须把HEPES溶液先调整pH到7.2。
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-8-22 17:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
肯定不行！
本来不加HEPES，培养液的PH值是正好的。如果加了，一定要用NAOH调整PH值。不过，告诉你一个妙招：在没加HEPES之前，记下培养基的颜色，当加了HEPES后，再调整到那种颜色。一般是：晃一下，占在壁上的培养基有一点点紫即可。这样，过滤完后。在加血清PH值正好哦。
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