[求助]流式测细胞周期前如何固定细胞

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标题:[求助]流式测细胞周期前如何固定细胞

969[使用道具]
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发表于 2012-8-22 19:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

流式测细胞周期前如何固定细胞？对于不同的培养时间，固定时间长短有影响吗？

vera+[使用道具]
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发表于 2012-8-22 19:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

细胞用PBS洗两遍，70%预冷酒精固定，4度保存，一般要过夜，时间太短了不好。

rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-8-22 19:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

然后在上机测细胞周期前要再用PBS洗两遍，上清倒掉，然后加入PI染料，至少放置20分钟（室温下），就可以上机检测了。

rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-8-22 19:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不用酒精固定时也要重复后面的步骤。

S6044[使用道具]
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发表于 2012-8-22 19:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

刚做过,结果还可以,给个详细步骤吧

(注意控制细胞数量,大约1,000,000个左右,)

1, 细胞消化后用PBS洗一次,(最好用DMEM+胰酶消化,否则细胞不容易成但单细胞,且消化过程中不要去移动瓶子)

2,用200微升PBS制成细胞悬液,加预冷的70%酒精2毫升,边加边摇匀,后置4度冰箱,一般一个小时就差不多了,跟培养时间应该没多少关系

3,弃上清,PBS洗一次,然后加400微升PBS成细胞悬液,然后加50微升PI.后避光，送检

969[使用道具]
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发表于 2012-8-22 19:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

对于不同的培养时间，是不是可以固定之后放到冰箱，最后一起测定，这样有影响吗

eric930[使用道具]
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发表于 2012-8-22 19:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以。我个人意见，固定时间少于12小时可能还没有固定透，做流式固定后几天内没问题的。

969[使用道具]
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