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标题:[求助]如何根据MTT结果求药物的IC50值

yychen[使用道具]
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发表于 2012-8-24 13:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]如何根据MTT结果求药物的IC50值

本人即将做MTT实验来确定我所用的处理药物的IC50值，具体设计如下：
实验设置了药物处理组和对照组，药物设置了6个浓度，选取了五个时间点，通过测得各时间点各药物浓度的OD值后，如何求得该药物的IC50值呢？
另外，我想问个问题，如果MTT测得了药物的IC50值，那我下面要进行的RT-PCR实验来确定药物处理前后的mRNA的差异，是否就可以只测IC50值这一个浓度处理前后mRNA的表达差异呢，还是每个浓度都要测呢？
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BOSS2011[使用道具]
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发表于 2012-8-24 13:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

分别算每个时间的IC50值
BLISS法计算IC50
举个例子：各组浓度0.1、0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001，稀释倍数为10，最大浓度为0.1，抑制率为0.95、 0.80、0.65、0.43、0.21，0.06。代入
计算公式：
Pm=0.95
Pn=0.06
P=0.95+0.80+0.65+0.43+0.21+0.06=3.1
Xm=lg0.1=-1
lgI=lg0.1/0.01=1
lgIC50=-1-1*(3.1-(3-0.95-0.06)/4)=-3.6025
IC50=0.00025
选用IC50一个浓度还是选用几个浓度由你自己决定。出于统计学考虑，我建议选用几个浓度，既有低浓度，又有高浓度。
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HP007[使用道具]
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发表于 2012-8-24 13:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用SPSS进行曲线拟合，列公式，求IC50即可，生物谷有SPSS拟合曲线的方法介绍
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yychen[使用道具]
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发表于 2012-8-24 13:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

曲线拟合出来了，再怎么列公式啊，如果设的浓度并非等比，那公式是不是不能用啊，那又怎么办啊？急！！！如果可能的话，请详细告知具体步骤！
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owanaka[使用道具]
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发表于 2012-8-24 13:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1. 曲线拟合后的线图横坐标为等差数列，如果浓度是等比，MTT的结果（纵坐标）必须取LOG值，这样才能保证曲线的合理。
2. SPSS拟合曲线时，使用ANOVA可以作出一系列的数字结果，直接可以列出公式，“生物谷”上有具体的说明，完全可以采用，非常方便，建议仔细阅读。
3. 如果还是有问题，能否pm给我你的邮箱，我的方法可以发给你。
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-8-24 13:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

lgIC50=-1-1*(3.1-(3-0.95-0.06)/4)=-3.6025
请问这公式中的３是怎么来的？如果浓度非等比，那该公式还能用吗？
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2012-8-24 13:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

公式中加3是因为拟合出的曲线横坐标位＋1，而等比的浓度0.01的Log值为
－2，如果不加3转换为＋1的话，拟合的曲线不合理。
另外，如果是等差数列，直接用MTT的结果（抑制率）即可，不必进一步转化为Log值。
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junhun[使用道具]
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发表于 2012-8-24 13:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有一个网可以进行在线计算cuturl('http://chiryo.phar.nagoya-cu.ac.jp/javastat/Graded50-j.htm')，还不错。
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