细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]星形胶质细胞培养

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 11  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]星形胶质细胞培养

xingyi08[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76899
精华 0
积分 496
帖子 671
信誉分 100
可用分 4201
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态 离线
1

发表于 2012-8-24 13:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]星形胶质细胞培养


用DMEM/F12 或DMEM培养基培养原代星形胶质细胞，在不加生长因子及其他成分的情况下，细胞能传多少代？谢谢！
顶部
tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态 离线
2

发表于 2012-8-24 13:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我养的是人胎脑astrocyte，具体传代可以传多少我不清楚，我只知道至少可以培养两个月以上。
因为我发现传代后长得很慢，所以大部分时间我都没有继续传代。
如果不加细胞因子也没关系，连续一周以上不换液，它就可以迅速长满。
有战友在神经生物版曾经提到过他培养的小鼠astrocyte传代五代以上后细胞变的很大，荧光染色没有染出来，我把自己养了快两个月的细胞做了次荧光，虽然细胞也是变的很大，形态很怪，实际上不成问题，仍然是astrocyte，荧光非常明显，不需要担心，如图，再奇怪它也是astrocyte


查看积分策略说明
附件
2012-8-24 13:47
84822827.snap.jpg (30.18 KB)
 
顶部
tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态 离线
3

发表于 2012-8-24 13:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上面的是明场下的，这个是荧光
一抗GFAP，二抗是TR


查看积分策略说明
附件
2012-8-24 13:47
12065853.snap.jpg (19.85 KB)
 
顶部
dog002[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76386
精华 0
积分 916
帖子 1452
信誉分 100
可用分 8133
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
4

发表于 2012-8-24 13:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我养的是人胎脑astrocyte，具体传代可以传多少我不清楚，我只知道至少可以培养两个月以上。
因为我发现传代后长得很慢，所以大部分时间我都没有继续传代。
如果不要也没关系，连续一周以上不换液，它就可以迅速长满。
有战友在神经生物版曾经提到过他培养的小鼠astrocyte传代五代以上后细胞变的很大，荧光染色没有染出来，我把自己养了快两个月的细胞做了次荧光，虽然细胞也是变的很大，形态很怪，实际上不成问题，仍然是astrocyte，荧光非常明显，不需要担心，如图，再奇怪它也是astrocyte

————————————————————————————

我也在养astrocyte，大鼠的 是新手 想讨教一下：
1 要加细胞因子的话 ，加何种细胞因子，哪里有卖
2 你铺板吗 铺与不铺差别大不大
顶部
dog002[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76386
精华 0
积分 916
帖子 1452
信誉分 100
可用分 8133
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
5

发表于 2012-8-24 13:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上面的是明场下的，这个是荧光
一抗GFAP，二抗是TR

——————————

TR是啥东东
顶部
tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态 离线
6

发表于 2012-8-24 13:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果你要培养ASTROCYTE，没什么必要加细胞因子，如果一定要加，bFGF（碱性成纤维细胞生长因子）就可以，这种因子可以促进细胞生长，不过，老实说，胶质细胞跟神经元不一样，不需要因子来维持
bFGF是很常见的细胞因子，各个试剂公司都有的卖，不过好像有点贵
可惜你养的不是人源细胞，不然就可以买国产货了，呵呵～暨南大学生物工程研究所卖重组人bFGF，真是很便宜啊，10微克一瓶，才卖20元，真是太便宜了，质量嘛，我用过了，还不错呢

TR 就是德克萨斯红（TEXAS-RED），绿色激光激发得到红色荧光

下面是新编全医药学大词典的解释
Texas Red
德克萨斯红[Molecu-lar Probe公司生物学染料的商标,是磺基罗丹明101 的两种单磺酰氯衍生物的混合物]

一抗我用的兔抗人GFAP，二抗是羊抗兔TR，都是从舒伯伟公司买的，这个公司代理SIGMA的产品
二抗最好是买国外公司的，质量很好，荧光也稳定，二抗最好常温避光孵育45min以上，不过不要超过90min，我的经验是这样，我一般孵育60min
如果需要详细点的protocol，尽管问，虽然在下水平有限，也会尽力回答的
顶部
tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态 离线
7

发表于 2012-8-24 13:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没必要铺板的，胶质细胞贴壁能力还是很强的
如果你想铺板，用多聚赖氨酸包就行，1％（1mg/ml）的PLL或者PDL，据说右旋多聚赖氨酸（PDL）比较不容易分解，不过好像没什么大区别，没有PDL，用PLL也是一样的
如果要铺板，记得确保你制得的细胞悬液没有太多杂质，因为杂质也会被黏附到壁上的，而且如果杂质黏附到壁上会抢占细胞贴壁生长所需要的地方，会造成细胞生长情况很不好；如果细胞因为杂质的关系长的不好也不要急，再消化一次转个瓶就可以了（切身体会，呵呵）
顶部
tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态 离线
8

发表于 2012-8-24 13:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的经验是二者差别不大，而且有种感觉，铺板还不如不铺呢，至少不铺板的时候杂质少点，呵呵呵呵
顶部
xingyi08[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76899
精华 0
积分 496
帖子 671
信誉分 100
可用分 4201
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态 离线
9

发表于 2012-8-24 13:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢你。我是山东的，养细胞是个新手，还望多多指教！还有，你周围有作VEGF的吗，我得课题与缺氧状态下的AS分泌VEGF有关，政苦于无人咨询，很着急！
顶部
tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态 离线
10

发表于 2012-8-24 13:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哈哈，我是女生没错，也是山东的，老乡啊
我的部分课题跟VEGF有关，不过不是你提到的那个方面
我有一部分课题是做内皮细胞的鉴定要做VEGFR-2，VEGF是用来诱导内皮细胞的呵呵
你这个课题是不是要用ELISA啊？我会留意帮你问问我的同学看看他们有没有做这个的
药理好像有同学是做缺氧模型时充氮气，但是具体的密度和流量我不太清楚
顶部
 11  1/2 12››