液质联用

最近买了api 4000 Qtrap，遇到两个问题

1.        培训人员说ion trap可以做enhanced product ion scan，说其intensity比用Q3做product ion scan 要好。

问题：ION TRAP的sensitivity比triqutrapole 要好么？那这样的话，为什么做MRM的时候，最后的analyzer不用ION trap，而用Q3。

这个问题培训人员没有能很好的回答我的问题，而我对ion trap定量不好的问题还是有点晕

2.        在用我的几个compound跑的时候，hplc没有能分开其中的三个compounds。培训的人说，coelution也可以定量，不要紧，反正是我MRM(我主要做小分子的定量)。

好像他说的也有道理。可是又想想，不需要分开，那还需要hplc柱子做什么。为什么那么多文献都费尽力气还跑gradient就是要分开各个compound。培训人员说这样只是降低一点点灵敏度。还是晕。不会就这样吧。

问题1：ion trap做定量没有三重四极杆好，我有同事，他们以前实验室有两台AB的仪器，一台4000，一台Q－trap，他说Q－trap定量远不如4000。

当然Q－trap也有自己的优点，它在代谢产物的定性方面是很好的，再说它走一针可同时得到定性和定量的结果。但从目前的情况来看，做定量是三重四极杆最好。

问题2：作液质对HPLC分离的要求不是很高，因为除了有色谱分离，还有质谱检测器不同离子通道的分离作用，当然如果你正好碰到同分异构体，母离子和子离子都一样，那你是得在色谱分离上下点功夫。

梯度和等度的比较：如果作新药和西药只做一两个化合物，是等度洗脱好，速度快，但也并非越快越好，特别在分析生物样品时，考虑到基质效应，保留因子控制在2-3左右最好！

梯度洗脱适合分析多个结构不同的样品及化合物与代谢产物一同鉴定的时候，比如苷和苷元的一同测定（节省分析时间），另外很多做合成化学的分析实验室用的也是一通用的梯度洗脱方法，一个方法搞定大部分样品。

我们曾经遇到过没有分开的两个化合物，两者之间相互影响离子化效率，标准曲线只能作出指数函数或二次函数；但把两者在HPLC上分开后就可以做出很好的线形。

谢谢两位的回答，还是有点疑问：

我明白triquatrapole会比ion trap的定量好，但是为什么？能从原理上讲讲么？

对于问题一， 4000 q－trap定量比不上4000？前者可是要贵的啊。 而且前者定量的时候用的还是Q1,Q2,Q3，没有用到ion trap啊

问题二，培训的人是说什么ion 通过skimmer是什么one by one的，thus decrease the intensity if hplc does not separate the analytes。是这样的么？

二楼的意思是：有可能没有办法做出好的calibration curve，所以最好在hplc上分开？

谢谢两位解疑。

巡洋舰是比小炮船大的多，也贵的多，可是它却进不了小河道巡防......

做定量本来就是ion trap的死穴，并不是仪器贵就意味着各方面都好......

如果在液相上无法得到较好的分离，会对后面的质谱检测造成很大的压力。

我觉得做定性和鉴定，分不开可以，但也只限于一个峰里包含几个化合物，如果包含5个以上，肯定离子要相互干扰很严重。

但是，做定量追求的是准、精密度、重现性。所以，要尽可能分开，反正摸摸条件，几个化合物总是可以分开的。这样，为自己减少点后面的麻烦（因为分不开，可能会导致定量数据通不过，实验重做，更加吃力）。你前面省事儿，最后可能更费事儿。

当然，要看问题的主要矛盾，如果真的是300个组分一起检，问题的主要矛盾变成了要一个实验检300个，那有几个峰没分开也就算了。

所以，要看你主要的任务是什么。经验多了，就可以根据自己的实际水平和你的任务的要求去想办法减少自己的时间、提高效率。如果你今天没把这两个东西分开，做了，也通过了，那也可以。

液相分离不好，就会出现离子抑制现象，出现离子抑制现象就会导致电离效果差，电离效果差会导致灵敏度查。跟后面没关系。不电离肯定没信号。可以通过不同的梯度，分离开。

问题一：4000-Trap是在api4000的基础上进行改进得到的三重四极杆与线形离子阱的杂合体。

在使用过程中，二者只能选择其一，也就是当你用来做定量分析时（MRM），只能用三重四极杆的功能而不能用离子阱的功能，ion-trap是在使用离子阱功能时才能用的，所以你在做定量分析（MRM）时，是不能用ion-trap来增加灵敏度的。而且在三重四极杆与离子阱两种状态下得到的质谱数据有时候是不同的，优化的参数也是不同的，所以建议你在定量分析方法优化时，不要使用离子阱的功能，也就是不要用带enhanced 的那几种扫描方式。

问题二：离子通过skimmer进入质谱确实是one by one的， 也就是持续的，但是依靠待测物的色谱不分离来增加灵敏度应该说是不对的，而且二者也没什么关系。

至于为什么要进行色谱分离上面几位已经说得很清楚了，我就不再罗嗦了。

离子阱模式有个把离子富集在阱里的过程，这个过程提高了灵敏度同时也损失了定量的准确性。
为什么提高了灵敏度呢？因为离子被富集起来了，然后一起送到检测器去，灵敏度当然就提高了。
为什么定量就不准了呢？我们定量的图其实是色谱图，就是说横坐标是时间。在定量的模式下，质谱作为一台检测器来讲对每个时间点的离子都应该是忠实的检测，而不是加以各种处理的。也就是说应该让离子连续的到达检测器，是不应该对不同时间点对离子加以不同处理。而离子阱的模式恰恰违反了这一点。另外离子阱还有空间效应，它不是能把所有到来的离子都聚集到，太多了就饱和了。
简而言之就是离子阱重要的参数是时间参数，四极杆的参数是空间参数（空间电场）。
4000QTrap的好处就是两种模式都可以提供。定量的时候用四极杆模式，定性的时候用离子阱模式。
陈勇

[ 本帖最后由 yong.chen.gss 于 2008-3-4 13:24 编辑 ]