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标题:[求助]细胞涂片固定后需要PBS洗吗？

any333[使用道具]
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发表于 2012-8-25 12:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞涂片固定后需要PBS洗吗？


我用细胞涂片做免疫组化，用多聚甲醛固定，请问固定后需要用PBS洗吗？
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xevin[使用道具]
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发表于 2012-8-25 12:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一定要洗，多聚甲醛固定前后都要洗。因为多聚甲醛会与蛋白质发生交联反应。
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any333[使用道具]
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发表于 2012-8-25 12:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问固定前为什么要洗呢？用多聚甲醛的固定的原理不就是利用它可以与蛋白发生交联反应吗？
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xevin[使用道具]
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发表于 2012-8-25 12:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们是把细胞直接传到盖玻片上让其生长，所以会有残留培养基，含有蛋白成分，影响多聚甲醛固定细胞
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hyuu[使用道具]
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发表于 2012-8-25 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也请教一个问题：
国外文献多聚甲醛多用3%的，
国内多用4%的

固定效果有差异吗
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xevin[使用道具]
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发表于 2012-8-25 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
其实国外也有文献是4％，应该差别不大。就好像有人固定1h，有人固定20分钟；这两种我都试过，没有差别。
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any333[使用道具]
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发表于 2012-8-25 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我找了份博士德的说明书，用蒸馏水洗，蒸馏水和PBS洗对结果有什么影响呢？还有就是我的多聚甲醛总是有絮状的东西溶不掉，如何处理呢？
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newway[使用道具]
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发表于 2012-8-25 12:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

配制多聚甲醛的时候加点NaOH就可以溶解了
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any333[使用道具]
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发表于 2012-8-25 12:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1000ml大概要加多少NaOH？我加了几滴，没有变化，不感再加了，怕PH值太高了。
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-8-25 12:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

固定前用PBS洗，固定后用蒸馏水洗。
配制多聚甲醛用磷酸缓冲液，加温后边搅边滴加NaOH至澄清。因为是pH缓冲液，所以对pH影响不大。
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