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标题:[求助]请问各位前辈:细胞爬片的步骤是怎样的?

wanglaoshi[使用道具]
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1
 

[求助]请问各位前辈:细胞爬片的步骤是怎样的?


请问各位前辈:
1。什么是细胞爬片?其用途是什么?
2。细胞爬片的步骤是怎样的?
3。细胞爬片需要哪些实验材料和仪器?
谢谢各位前辈的殷切细致的回答!谢谢!
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TNT[使用道具]
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我的理解是
细胞爬片就是让细胞(贴壁细胞)在片子(盖玻片)上生长。主要用来做免疫细胞化学啊,原位杂交等吧。在做这些实验时,制作标本有两种,一是离心做细胞涂片,二是细胞爬片。利用贴壁细胞在玻璃等物质上贴壁生长的特点,让它在盖玻片上生长,可以使制作的细胞片子更牢固,在后面的洗涤过程中,不易脱落。特别是在用粘附剂如多聚赖安酸处理过的片子上,细胞贴得更牢固。
细胞爬片:将片子放在细胞培养板(均已经消毒)中,加入一定数量的细胞悬液,让它生长24小时。待它贴壁后,细胞爬片就制作好了。
需要的器材:多聚赖安酸、合适大小的盖玻片(根据细胞培养板孔大小而定)、细胞培养板、培养基。
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glass[使用道具]
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我也没看懂,也想问一下:
A.有些实验室用的是塑料的一次性培养皿,有的实验室用的是玻璃培养皿,请问这两种材料都需要加多聚赖氨酸以使细胞贴壁生长吗?听说塑料的壁上已经在产品生产过程种涂了贴壁材料,请问就是多聚赖氨酸吗?
B.细胞培养板就是指96孔板,24孔板这样的板子吗?若不是,能贴张图片看看吗?
C.细胞涂片和细胞爬片有什么区别哟?看您的意思是
细胞爬片:就是把盖玻片放在培养板中的细胞混悬液中培养一段时间,等细胞贴壁生长了,爬片就算制作完毕(制作完毕后要保存吗?怎样保存?还是只是照照片留下资料?)
细胞涂片:离心完了以后怎么涂到片子上?步骤怎样,恕我愚笨,没看懂,还望各位高手详细解释一下!不胜感激!
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cj_mondy[使用道具]
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我也没看懂,也想问一下:
A.有些实验室用的是塑料的一次性培养皿,有的实验室用的是玻璃培养皿,请问这两种材料都需要加多聚赖氨酸以使细胞贴壁生长吗?听说塑料的壁上已经在产品生产过程种涂了贴壁材料,请问就是多聚赖氨酸吗?
B.细胞培养板就是指96孔板,24孔板这样的板子吗?若不是,能贴张图片看看吗?
C.细胞涂片和细胞爬片有什么区别哟?看您的意思是
细胞爬片:就是把盖玻片放在培养板中的细胞混悬液中培养一段时间,等细胞贴壁生长了,爬片就算制作完毕(制作完毕后要保存吗?怎样保存?还是只是照照片留下资料?)
细胞涂片:离心完了以后怎么涂到片子上?步骤怎样,恕我愚笨,没看懂,还望各位高手详细解释一下!不胜感激!

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让我也来为细胞版作贡献吧!
A.多聚赖氨酸可以防止脱片,利于贴壁。
B.用的就是细胞培养版,如6孔板、12孔板、24孔板。孔内需放置消毒好的盖玻片,使细胞在盖玻片上贴壁生长。
C.爬片和涂片都是用于染色或行免疫组化等检查。对于贴壁细胞多用于爬片,对于悬浮细胞用于涂片。
D.制作完毕后需固定后进行或保存。
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vera+[使用道具]
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我还想问问您:
A.您对于我说的


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塑料的壁上已经在产品生产过程种涂了贴壁材料,请问就是多聚赖氨酸吗?
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vera+[使用道具]
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还是没有作答。我还是不懂。
C.细胞爬片我算是大致明白意思了。
那么悬浮细胞的

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离心完了以后怎么涂到片子上?步骤怎样

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问题还是没有搞明白。
继续请教。
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一叶[使用道具]
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A.您对于我说的还是没有作答。我还是不懂。
C.细胞爬片我算是大致明白意思了。
那么悬浮细胞的问题还是没有搞明白。
继续请教。

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塑料培养皿我没用过,具体材料我不清楚。
至于如何涂片?曾经问过别人,告诉我用针头涂。我觉得不妥。记得学微生物的时候,有一种涂片用具(材料为细铁丝,前头为圆形或椭圆形,直径约2mm,后头为杆部,长约10cm。),手持杆部,用圆头挑悬液,在圆头处成液膜,然后涂在载玻片上。虽然我没作过,但我认为可行。
希望对你有帮助!
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qqq111[使用道具]
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我也补充一个小窍门吧!做细胞爬片时,比如在六孔板中放入盖玻片,但是六孔板的孔底面积往往会比玻片面积多出一部分,加细胞悬液时常常就是细胞铺满整个孔底,有时细胞生长边集现象,就是靠近壁边缘密度要高些,这样处于中央玻片上爬的细胞数量就可能相对较少
比较好的做法是将玻片放入孔板的孔内后,加细胞悬液时只滴到玻片上,一直滴到液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘(因为液体表面张力作用可以很容易做到这一点!),放在培养箱里,等细胞贴壁后,取出,再滴加培养基布满整个孔底,继续培养,这样玻片上的细胞生长的密度就很集中合意了!
个人的经验!效果不错!有兴趣的可以试试
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66小飞侠[使用道具]
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相信你的问题已经懂了。我就谈谈细胞涂片吧。对于悬浮细胞一般采用离心涂片的。
过程:将合适细胞浓度的悬浮液取100ul-200ul左右,加入离心涂片机的加样孔中,离心转速为3000转左右。瞬间离心,则细胞悬浮液就会打在玻片上,而液体就会被紧贴在玻片上的滤纸所吸掉。这需要专用的细胞离心机,若你有,看看就明白了。
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二丫头466[使用道具]
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楼上站友的建议很好 ,甩片效果是不错,但是好多单位可能设备不允许.涂片应该更实用一些.
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