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标题:[求助]请教HepG2的培养液及细胞形态

bluelake[使用道具]
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发表于 2012-8-25 14:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]请教HepG2的培养液及细胞形态

我最近向一个朋友要了一只HepG2细胞，因为朋友说他们是用含10％血清的1640养的。所以我一直用1640养，可是最近查文献，发现别人都是用DMEM养的，而且我的细胞状态看起来还不错，长的很快，漂的也很少，只是细胞形态与园子里其他战友发的不太一样，就是有点圆圆的，不像那种典型的梭形的，不知道是不是培养液造成的。
希望各位战友给我分析一下原因，不胜感激！！
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2012-8-25 14:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上的师兄，我现在再养HepG2215细胞，是HepG的一个分支了，我是用IMDM＋15％进口血清养的，状态也还行，最近血清调整到10％，状态也行。呵呵
可是我们从培养液及细胞中提取HBV DNA出现了问题，两个月前要来的细胞，提取经PCR鉴定后可以看到条带，到最近做试验铺板，再提取就 出不来 了。那是不是也与培养液或是时间太长有关，HBVDNA 是转染到HepG2细胞染色体上的呀，文献上说可以稳定传代的，难道就 丢 了 ？请师兄指教。
下面是HepG2215细胞的（40×）下的照片。
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2012-8-25 14:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

图在这 呵呵


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2012-8-25 14:58
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-8-25 14:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这种细胞很容易长呀,就用1640与10%FCS,巨发长呀.
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2012-8-25 14:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是 但国产的FBS不行 养不好 代谢物很快聚集 细胞状态就不好了
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bluelake[使用道具]
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发表于 2012-8-25 15:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位战友的指教！
你好，因为我也是刚样HepG2久，我甚至都不知道HepG2有很多亚型，还请你介绍一下，HepG2到底有哪些亚型，各有什么特点？
如果其他战友知道，也恳请各位赐教！
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发表于 2012-8-25 15:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.HepG2细胞对培养条件要求不高，用10%FBS的DMEM和1640都可以。
2.woodenfish1981战友，HepG2215细胞的培养需要加G418,不加G418其HBVDNA很容易丢失。不过你的细胞图片和我养的HepG2215细胞完全一样啊。我加G418的浓度为380mg/L。还有，我培养3天以后的培养液中可以稳定地检测到HBV DNA。
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2012-8-25 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我培养HepG2215时加G418了，浓度是400mg/L.可是我培养液提取
HBV DNA总是不稳定，如果细胞没问题的话，可能就是方法的问题了。师兄能把你的具体的提取程序告诉小弟吗，不胜感激！我在线等。
我只在养HepG2215,对HepG2这个细胞系不是很了解。我这有篇关于养HepG2条件优化的文章，师兄可以看一下，希望能有所帮助。
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发表于 2012-8-25 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
其实HEPG2细胞非常好养的，我用的是国产的小牛血清，10%（有时我嫌它长太快了，就用5%）；1640和DMEM都可以的，形态也都一样的，不会有什么变化。。。

只是要注意：
一。。还是老一套：无菌操作
二，，不要总更换培养液，用1640就一直用1640，用DMEM就一直用DMEM；总换条件肯定对细胞不好的。。。。
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