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标题:[求助]筛选抗肿瘤化合物方法

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发表于 2012-8-27 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]筛选抗肿瘤化合物方法


因本人以前没有养过肿瘤细胞，最近要筛选一些抗肿瘤新合成的化合物，多谢前辈赐教！
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发表于 2012-8-27 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般采用MTT法和SRB方法,上海药物研究所筛选抗肿瘤药物就采用这2种方法
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发表于 2012-8-27 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
下面是是我们用MTT筛选药物得方法：
1）收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，分于96孔板，每孔180μl，3000-10000个/孔。
2）置37℃、5%CO2温箱培养使细胞贴壁，培养6-24小时。
3）加入待筛样品20μl，继续培养44小时。
4）小心吸去上清，加入80μl新鲜RPMI 1640培养液，再加入20 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4 h。
6）然后吸掉上清，每孔加入150 ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490 nm处测量各孔的吸光值。
7） 同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定3复孔。
8） 计算抑制率＝[(对照-空白)-(给药-空白)]/(对照-空白)X100%.
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发表于 2012-8-27 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

孔里的细胞老是不均匀，用排枪，每次吸前都吹打混匀，但是效果还是不行，有什么办法嘛？
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发表于 2012-8-27 15:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
多谢！多谢各位，我打算肿瘤细胞筛选，我查资料说用P388和L1210细胞，到底哪一种最好，还是有其它的？“一般采用MTT法和SRB方法,上海药物研究所筛选抗肿瘤药物就采用这2种方法 ”，我准备用MTT法，是不是可以，还是必须MTT和SRB同时都做，刚刚开始养肿瘤细胞，多谢各位指点，不胜感激！
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发表于 2012-8-27 15:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果有酶标仪可以马上测定就可以用MTT，如果要拿去别的地方就可以选用SRB，SRB与MTT的最大区别在于可以放置处理好的样品，但操作比较麻烦。
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daod[使用道具]
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发表于 2012-8-27 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

到底选用哪一个细胞株筛选最好啊？
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发表于 2012-8-27 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最好是选取2－3株细胞
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daod[使用道具]
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发表于 2012-8-27 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
能详细一点具体一点吗？我以前养过内皮细胞，没有养过肿瘤细胞。先谢了！
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HP007[使用道具]
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发表于 2012-8-27 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主，以下是我在国家新药筛选中心的网站上看见的关于抗肿瘤药物筛选所采用的方法：利用小鼠白血病细胞和多种来源清楚、病理分型明确且对药物敏感的人恶性肿瘤细胞株，在细胞培养板上观察被测物质在体外对肿瘤细胞的生长抑制或杀伤作用；采用四氮唑盐酶还原法（Microculture Tetrozolium, MTT）或磺酰罗丹明B法（Sulfor Rodamine B，SRB）测定化合物对肿瘤细胞的生物效应。初筛用的细胞株分两组共四个细胞株：(1) P388（小鼠白血病细胞）和A-549（人肺腺癌）；(2) HL-60（人急性早幼粒白血病）和BEL-7402（人肝细胞性肝癌）。

另外我们所选用的瘤株是ＫＢ，ＨeＬa，等等．最重要的是你所筛的药物预计是哪个方面的呢？
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