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标题:[求助]关于肿瘤组织消化所用的DNA I酶

BUK[使用道具]
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发表于 2012-8-27 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]关于肿瘤组织消化所用的DNA I酶


请教各位大侠，
我购买了promega公司的RQ1 RNase－Free DNase,
其内分装三个管子，分别为
1，RQ1 RNase stop solution 1ml;
2,RQ1 RNase 10** Reaction buffer 1ml;
3,RQ1 RNase－Free DNase 1000u.
我欲将其用于肿瘤组织消化，怎样使用呢？
（说明书是用于RT-PCR用途的）。

先谢谢大侠不吝赐教！
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fklo83[使用道具]
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发表于 2012-8-27 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没用过promega公司的RQ1 RNase－Free DNase,
但知道DNase 不能单独用于组织消化。
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fklo83[使用道具]
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发表于 2012-8-27 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
文献说是0.002％浓度的DNA I酶，是和胶原酶和/或透明质酸酶一起加入肿瘤组织中吗？
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-8-27 16:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实组织消化 DNase 并不是必须的，而且对细胞不利。我们在做胰岛分离时仅在胰岛粘连影响纯化时才临时往细胞悬液中加几滴（0.1%）。本人认为肿瘤组织消化使用胶原酶振摇消化就行，如果在消化过程中发现胶状物再滴加也不迟，最好是不用。
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2012-8-27 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

继续问一下，谁知道具体的Dnase在细胞培养中的作用。
如表皮细胞的分离中，用dispase消化后，继续用Dnase的作用是什么？着急知道，请大侠们告知，流着鼻涕使劲感激：）
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-8-27 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

组织在酶消化分散的过程中，由于所添加的酶不能降解所有的成分，未降解的组织成分会形成胶状物粘连细胞，影响细胞的分散，此类物质能被DNase分解、溶解，使粘连的细胞能分散。
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flower-201[使用道具]
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发表于 2012-8-27 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问：你们做大鼠还是小鼠的胰岛分离啊？我在做小鼠的胰岛分离，总是得率不高啊，可以请教一下你们得方法?
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