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标题:[求助]培养的细胞胞质中出现空泡，不知如何解决

伊莎贝拉[使用道具]
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发表于 2012-8-28 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]培养的细胞胞质中出现空泡，不知如何解决

如题：培养的细胞胞质中出现空泡，不知如何解决
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TAT[使用道具]
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发表于 2012-8-28 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
真是没有见过这种情况？你培养的什么细胞？是不是原虫？
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qqq111[使用道具]
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发表于 2012-8-28 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也想请教一下，我养是的k562细胞，在倒置显微镜下活体观察，可以看见透亮的圆形区在细胞上或细胞之间；giemsa染色后，我发现许多细胞上都有一个圆形的淡染区（无色或淡红色），在细胞之间也有圆形的淡染区（比细胞小很多，著淡红色），请问有站友见过这种现象吗？是我的细胞污染了吗、但细胞状态好像还可以，有没有可能是支原体污染，在400倍的情况下。支原体可以看得见吗？
很是头疼！先谢谢大家了！
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greenbee[使用道具]
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发表于 2012-8-28 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的细胞也出现了这种问题，不过这两天好像又有所缓解，空泡没有了，正在纳闷中............
请教，请教！
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greenbee[使用道具]
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发表于 2012-8-28 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
附：我养的是hep-2细胞，用的DMEM培养基，之前没有出现过类似的问题。
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yapuyapu[使用道具]
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发表于 2012-8-28 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

原代细胞培养的过程中经常出现这样的情况，是有些细胞处于终末分化状态，不会再分裂，时间长了就会空泡化而死亡。
传代细胞出现这种状况比较少见，可能的原因是细胞代龄较长，老化严重。
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发表于 2012-8-28 13:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能是细胞比较衰老吧，我以前也养过，因为我的细胞传代太多所以出现空泡，你的是不是也传了很多代？
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ffooll[使用道具]
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发表于 2012-8-28 13:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我说几句吧
传代次数太多，细胞老化会出现上述的情况，但是还不排除其他因素
胞质中出现颗粒、脂滴或空泡也可能是细胞代谢不良的反应。我前一段时间养成纤维细胞（原代）的时候也出现过跟战友类似的情况，很是头疼。后来请教过一些老师后发现细胞状况有所改变，目前培养的还未出现此情况。
1、你可以将血清的浓度提高10％到15％最高到20％
2、血清的质量，如果是国内的血清的话不同的批次之间的差异很大，可以借用些质量好的血清试试，看细胞状态是否会改变
3、把细胞消化收集起来，然后离心后重悬，重新种植。
4、培养基里添加谷氨酰氨
能想到的就这些了
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hot_hot_hot[使用道具]
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发表于 2012-8-28 13:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想有没有可能是胶原虫，除了细胞形态学的实验它并不影响作其他的实验。不过记得勤换液，在细胞状态好的情况下它可能少一些，国产的血清很多里面带有胶原虫。
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eric930[使用道具]
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发表于 2012-8-28 13:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个情况我经历过两次,个人感觉还是细胞代谢障碍的问题,传代的次数可能不是关键因素,应该可以调整得过来,细胞长不好时总是有压力,那一段辗转难眠啊!好在第一次顺利解决了,当时是感觉生长液的PH值不对,就用PH值试纸测了一下,大概6.7左右,加碳酸氢钠调到7.2左右,过了一段就好了.
再说第二次,当时有同事细胞污染,我的一部分细胞也污染了,凡是明显污染的都扔了,剩的几瓶细胞质出现空泡,细胞轮廓不清晰,我调整了几天,好了一些.中间查了一些相关资料,大概有一下一些可能的原因:
1) 不排除轻度污染的可能,重度污染会伴有培养液的浑浊.
2) 培养液的PH值与细胞正常所需PH值差别太大.
3) 还有一个大家易忽略的问题,我从香港一家研机所的资料中查到如果消化细胞吹打时力度过大,产生太多气泡,长期存在也会出现这种现象. 原资料:
有條紋出現:  局部濃度過高
細胞剝落:  細胞接種太多,或培養時間過長
Roller Bottle中有環狀物出現:  振盪擴散轉子速度太快
Roller Bottle僅有單邊有環狀物出現:  振盪擴散轉子速度太慢
泡质有空洞:   培養基氣泡太多
細胞成黏稠狀:  trypsin(胰蛋白?)處理過久

4) 营养缺失时,细胞变形较常见,出现空泡的几率不太高,但也可以添加谷氨酰氨或提高血清浓度做尝试.
热烈欢迎有此经验的战友来指导一下大家!
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