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标题:[求助]流式细胞术中细胞的准备

vvmmoy[使用道具]
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[求助]流式细胞术中细胞的准备


我想将药物作用的细胞送去作流式,需要对照(未作用组)吗?细胞密度该接种多大?我想连续检测两天,想将标本一次送去,标本该怎么处理?
急!
谢谢!
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ladyhuahua[使用道具]
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肯定要对照组,而且是每天的都要对照组,也就是说,24和48小时的对照组都要有的。

做流式的细胞要大约5X10的5次方,接种的细胞浓度看你原来是多大,如果是5X10的4次方接种的,那大约要100ml的培养瓶2瓶就够了。

因为第一天的细胞(24h)可能还没达到对数生长期,所以接种量要多一些,24小时正常对照要100ml的2瓶,每瓶10ml。药物处理组2瓶肯定不够的,看你的作用浓度定了。

48小时的正常1瓶100ml的够,但处理组的可能不够的。

标本处理:收集细胞后,用PBS洗三次,最后一次过后,用95%的冰酒精固定,细胞要打散,越分散越好,放在4度冰箱里,等第二天的完了一起送就可以了。

建议:为了好做统计,最好做3次重复实验。

我说明白了吗?
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eric930[使用道具]
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请问三次重复实验是指一个管子测三次还是一种细胞做三管测三次?
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呵呵,楼上的意思是同一个实验重复三次。
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ladyhuahua[使用道具]
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请问三次重复实验是指一个管子测三次还是一种细胞做三管测三次?

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一个管子测三次没什么意义吧!

也可以同时做三个平行管,不过要的细胞太多了,不好弄。
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ladyhuahua[使用道具]
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呵呵,楼上的意思是同一个实验重复三次。

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是这个意思。
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vvmmoy[使用道具]
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我要检测的是第三天和第四天,不知实验组一瓶细胞够不够?我的接种密度是1x10*5。
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ladyhuahua[使用道具]
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我要检测的是第三天和第四天,不知实验组一瓶细胞够不够?我的接种密度是1x10*5。


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最好备2瓶。多一点没关系,少了不行了就。

不知道你的药物浓度是按多大加的,所以不敢保证一瓶够。
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milkdog[使用道具]
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请问,做流式前细胞用95%乙醇固定,最多可以放4C几天?
3-4天可以吗,谢谢!
还有,5X10的5次方,这个细胞密度好高阿,我在24孔板里养的,估计很难达到这个密度了。最多2X10的5次方。
我用PI和H33325双染,有需要注意的问题吗,谢谢!
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vvmmoy[使用道具]
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我检测的是细胞周期,明天就准备将细胞固定送出去检测了。但今天有同学告诉我说需要将细胞同步化后,再做实验然后才能送检。是这样的吗?如果是要用什么试剂和方法达到细胞同步化?希望大家能给予积极的帮助!尽可能的回答详细点。谢谢!急!
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