小中大[求助]骨髓细胞的转染后的筛选,是否必须依赖细胞因子?
我在做骨髓细胞的转染,想建立肿瘤细胞。知道以前有这样的报导,收集的骨髓细胞,转染癌基因后被转化成肿瘤细胞。可以不依赖任何细胞因子而快速增殖。
我的做法也是收集骨髓细胞(全骨髓细胞,未经5-FU处理,只去除红细胞),转染癌基因。在转染的前2天,IMDM培养基中含10% WEHI-3B上清。
我准备在第三天后准将去除WEHI-3B条件培养基,改为普通培养基。如果有细胞克隆增殖的话,再加G418筛选。
我有一个问题不确定:
1、是不是移除细胞因子后,骨髓中未转化的细胞会死亡(去除培养中的贴壁细胞、基质细胞)。是不是可以把这种方法做为筛选方法之一。是否可以取代G418筛选。
抱歉,我在别的版发帖,没有回应,我在这里再发一次。请战友帮助。