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标题:[求助]人体肿瘤组织制单细胞悬液复合酶消化的配方浓度？

wood533[使用道具]
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发表于 2012-8-28 14:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]人体肿瘤组织制单细胞悬液复合酶消化的配方浓度？


各位大侠，
迫切期待指教，
人体各部位肿瘤组织制备单肿瘤细胞悬液的消化酶复合配方是怎样的？
我已有胶原蛋白酶、透明质酸酶，DNA　I酶，还需要其他酶吗？

我是需要分离人体肿瘤细胞，组织来源人体胃、肠、肺、甲状腺、乳腺、宫颈、卵巢等各部分肿瘤。
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dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2012-8-28 14:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
单个肿瘤细胞获取:
取手术切除的新鲜肿瘤组织, 无菌生理盐水冲洗干净, 剪成1mm 3 大小的碎块, 加入终浓度为0.1% 的胶原酶,0.01% 透明质酸酶,0.002% 的DNA 酶, 37 ℃消化2 小时, 100 目尼龙网过滤, 500 r/m in 离心10 m in, 弃上清, 加入适量Hanks 液, 混匀后行不连续密度梯度离心, 2000 r/min 20 min, 收集富含肿瘤细胞的悬液, 洗涤2 次后, 用含10 % 血清的1640 培养液调整细胞数至实验备用。
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-8-28 14:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有的纤维化重的如：乳腺癌，肺癌、胃肠癌肿瘤的消化，
和纤维化低的如：肝癌、卵巢癌的消化，

这些浓度和消化时间该有些不同吧？请不吝赐教，谢谢！
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2012-8-28 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

纤维化重的如：乳腺癌，肺癌、胃肠癌肿瘤的消化用胶原酶3，浓度100-150u/L,消化3-4小时，其间要吹打。过滤是用300目尼龙膜好。纤维化低的如：肝癌、卵巢癌的消化用透明质酸酶或者胰酶等，时间与浓度有关，参考使用说明书。
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-8-28 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我就是在网络上没有找到有具体说明的说明书呀，
痛苦着呢。 : (
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发表于 2012-8-28 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
酶的使用说明书向销售商索取！
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发表于 2012-8-28 14:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也想知道！！尤其是乳腺癌细胞单细胞悬液的制备方法：）越详细越好
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发表于 2012-8-28 14:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
制备单肿瘤细胞悬液时为什么要加入DNA 酶？很弱的问题！
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-8-28 14:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果细胞比较容易积聚的可以加入少量的DNA 酶,这样的单肿瘤细胞悬液比较均匀分散.另外我是用200U/ml的胶原酶1消化卵巢癌组织的,时间2小时左右,期间每15分钟震荡一次,效果还可以.偶才做这个不久,就这些经验了,希望大家继续关注这个,我继续学习咯
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3648755[使用道具]
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发表于 2012-8-28 14:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
200U/ml的胶原酶1是指工作浓度吗？
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