[求助]急问怎么把96孔板细胞铺匀

细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]急问怎么把96孔板细胞铺匀

12 1/2 1 2 ››

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]急问怎么把96孔板细胞铺匀

jkobn[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 75366
精华 0
积分 468
帖子 574
信誉分 101
可用分 3711
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态离线

发表于 2012-8-28 16:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

试验中要用到MTT，可是现在碰到最大的问题是复孔之间的OD值相差很大，我感觉最主要的原因是细胞没有铺均匀（我是把细胞稀释好后放在50ml离心管里再用200ul移液器逐孔加到96孔板里的，可是镜下观察还是不匀）。请问做过MTT的前辈，怎样避免这种情况呢？拜谢！

idea2011[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77656
精华 0
积分 552
帖子 783
信誉分 100
可用分 4726
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态离线

发表于 2012-8-28 16:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

MTT是我们实验室最常规的一个试验。几乎天天都有人在做。与MTT相关的问题，我已经回答过几个了。而且我是感觉这个试验越做越好做，现在几乎是没有什么问题了，呵呵。
根据个人经验随便说两句。
1，根据你所说的情况，我觉得操作是没有什么问题的，但是最重要的一点就是别忘了每加几个孔就要吹打一下细胞悬液，因为正常情况下细胞会沉降，如果从头加到尾不吹打细胞肯定不幸。
2，复孔很重要，必须要有。太离谱的数据扔掉也罢。
3，此外，有人还很强调边际效应，就是建议在培养板周围的孔不要用。我倒是没有觉得这很重要，但是，你不妨看看，分析一下，不好的数据是不是正好在周围的孔上。如果是，那下次再作不用周围孔试一下。

笑弯了腰[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 78476
精华 0
积分 232
帖子 203
信誉分 100
可用分 1756
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-29
状态离线

发表于 2012-8-28 16:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

其实象这种情况, 不是没有铺匀, 而是你逐孔加到96孔板时, 你稀释好的细胞悬液又下沉了.
所以在你做是要注意的是:
1. 细胞悬液一定要稀释好后,混合均匀;
2. 因为96孔板逐孔加需要一些时间, 为防止中间细胞沉降, 可以边加边晃动
装有细胞悬液的离心管, 并不时拿吸管吹吸混匀一下;
3. 实在不放心的话, 可以在加的过程中, 另外加几个孔, 马上做MTT检测平行度. 就免的实验很多天后才发现不对了.

jkobn[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 75366
精华 0
积分 468
帖子 574
信誉分 101
可用分 3711
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态离线

发表于 2012-8-28 16:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

看得出你们很有经验，我可能就是缺少用吸管吹匀的环节．另外，怎么才能保证细胞在孔里分布的均匀呢？感觉细胞老是集中在边缘．

tangxin_80[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79896
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4621
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态离线

发表于 2012-8-28 16:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

怎么不用排枪加呢，有排枪的话。另外把细胞悬液全部加完后，把96孔板向左摇动三下，然后再向右摇动三下。这样细胞在悬液里能稍微均匀点，细胞贴壁前不要轻易动培养板，这样细胞能稍均匀一些，但边上好像还是有点多，但已经好多了。

jkobn[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 75366
精华 0
积分 468
帖子 574
信誉分 101
可用分 3711
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态离线

发表于 2012-8-28 16:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

俺们没有排枪啊。不过您说得后面得方法倒值得一时，谢谢了！

october7[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 77254
精华 0
积分 448
帖子 616
信誉分 100
可用分 3856
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态离线

发表于 2012-8-28 16:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果细胞已经贴壁了再摇晃只能让细胞更加不均匀,同意楼上的意见.必须加几个就吹打一下.然后加后面的.不要吹打的太用力,小心给吹出来了,不要吹打过多,细胞会死掉,几下就行.

kswl870[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77250
精华 0
积分 559
帖子 755
信誉分 101
可用分 4621
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态离线

发表于 2012-8-28 16:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

其实，点任何板，要求细胞最均匀的方法是，首先细胞悬液稀释均匀，第二，各种板中的细胞加药量要大。这样绝对可以保证（细胞数目根据实验要求的天数来定）
96-well:180-200ul
24-well:1ml
12-well:2ml
6-well:至少3ml
以上为本人的试验经验，仅供参考

misswu61[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79547
精华 0
积分 747
帖子 774
信誉分 100
可用分 4691
专家分 100
阅读权限 255
注册 2011-12-13
状态离线

发表于 2012-8-28 16:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用200ul和100ul都试过，用的是排枪，而且加一下就吹打几次使其均匀，但是做出来的结果还是表明细胞分布不均，而且老是集中中孔的边缘。
请问还有什么好的办法嘛？

jkobn[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 75366
精华 0
积分 468
帖子 574
信誉分 101
可用分 3711
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态离线

发表于 2012-8-28 16:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

对啊。细胞在孔里分布老是不均匀啊。

12 1/2 1 2 ››