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标题:[求助]细胞凋亡发生在细胞周期的哪个阶段？

birdfish[使用道具]
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发表于 2012-8-29 10:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞凋亡发生在细胞周期的哪个阶段？


在用PI流式做细胞凋亡的时候，G0/G1峰前面的凋亡峰叫亚二倍体峰，说是因为细胞凋亡，DNA断裂，透膜后会有一部分DNA流失，所以凋亡细胞的DNA量是小于正常二倍体DNA量的，那是不是凋亡都发生在G0/G1的时候呢？是不是一个细胞处于分裂期间，即使受到损伤，它也会坚持分裂完成后才开始凋亡呢？
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2012-8-29 10:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不对，细胞周期分析是一个断面研究，反映纵多的细胞中哪些处于sub-G1?哪些处于G0/G1？哪些处于G2/M等等，凋亡是一直在进行的，不一定都发生在G0/G1期，G2/M期也是可以的，虽然细胞周期和凋亡有联系，但毕竟是两回事，细胞周期有细胞周期的机制，而凋亡也有其自身的分子基础，你所说的“是不是一个细胞处于分裂期间，即使受到损伤，它也会坚持分裂完成后才开始凋亡呢”，我看不会，比如细胞受到损伤，无法完成细胞周期，使之阻滞于细胞周期，触发一系列修复反应，如修复好了，细胞周期将继续进行，如没修复好，则触发凋亡机制进行凋亡。
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ha111[使用道具]
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发表于 2012-8-29 10:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

按你所说，凋亡的细胞DNA含量也有可能多于二倍体DNA量，那为什么还用亚二倍体区来定量凋亡呢？
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2012-8-29 10:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
按你所说，凋亡的细胞DNA含量也有可能多于二倍体DNA量，那为什么还用亚二倍体区来定量凋亡呢？

——————————

这是PI的缺陷
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remenb[使用道具]
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发表于 2012-8-29 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

首先，亚二倍体峰不是调亡的必要指标，这就和DNA Ladder一样，只是现象。其次，一般细胞处于G0/G1期的占约60%左右，而其它时相的相对较少。如果药物是针对G0/G1的，那么就可能有较明显的亚二倍体峰。如果是G2/M期阻滞的药物，如紫杉醇，那么亚二倍体峰就不会太明显，这并不意味着调亡很少。准确的测定方法不外乎一些分子标记，至少做严谨的研究应该如此。
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birdfish[使用道具]
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发表于 2012-8-29 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那么是不是高水平的文章都不用PI测凋亡，应该用annexin V，Tunnel等？
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remenb[使用道具]
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发表于 2012-8-29 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

当然啦，现象不能准确定量，所以要用annexin V 或者Tunel。其它的一些标记如PARP，caspase-3亦可。
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2012-8-29 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

增殖阻滞和促进凋亡是两个概念。细胞的凋亡可以发生在细胞周期的任何一期，是个连续的过程。DNA在细胞凋亡时裂解成180～200bp大小的片断，但具体是位于细胞周期的哪一期就很难说了。

细胞的生长周期可以分为四个阶段：细胞花6－8小时复制 DNA（S期）；3－4小时准备细胞分裂（G2期），随后1个小时细胞开始分裂（M期），子细胞又将花10－12小时准备下一轮DNA复制（G1期）。有些细胞也会选择离开生长周期，进入长期（可能长达数天、数周、数月乃至数年）的休眠状态（G0期）。所以在培养的细胞中大量存在的是处于G0/G1期的细胞。那么当凋亡途径被激活时各个阶段的细胞都被引导凋亡，而发生“dna变成小的片断离开细胞膜”。

所以该亚二倍体峰的主要贡献是处于G0/G1期的细胞。而不会发生处于分裂期间的细胞坚持分裂完成后才开始凋亡

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eric930[使用道具]
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发表于 2012-8-29 10:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

tunnel和流式细胞哪个试剂贵啊，不好意思，没钱作实验的人
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发表于 2012-8-29 10:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

annexin v的流式相对便宜一些，tunnel贵。
但tunnel可以做组织切片，annexin v不能。
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