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标题:[求助]淋巴细胞转染永生化的方法

00无名指00[使用道具]
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发表于 2012-8-30 12:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]淋巴细胞转染永生化的方法

实验需要,急需淋巴细胞转染永生化的方法,有用EB病毒转染的,但转染后的淋巴细胞具有生物毒性,请教园子里的各位大侠,可用更好的淋巴细胞永生化的方法?谢谢
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2012-8-30 12:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
EB病毒是转染B细胞的，可以使B细胞永生化，国内这方面也做的比较多，国外有人用CD40L刺激B细胞也可使B细胞大量扩增
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-8-30 12:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们试验室一直是用EB病毒转化B淋巴细胞建立细胞系，这种方法十分成熟，EB病毒的生物毒性在空气中很快消失的（注意带好手套，口罩即可）；且随着传代换液，病毒的生物毒性几乎不存在。EB病毒转化B淋巴细胞建立细胞系是一套非常成熟的方法，其优点：1容易取材（4ml外周血），简单易行。2连续传代染色体稳定 3可以得到取之不尽，用之不竭的DNA材料。4 恶性转化发生率低。所以推荐使用该方法。有问题可以于中国科学院遗传与发育研究所的徐玖瑾老师联系，她是这方面的专家。
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2012-8-30 12:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
淋巴细胞永生化一般需要传几代？大概需要多久时间？能否帮忙给些详细点的实验方法？谢谢
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fklo83[使用道具]
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发表于 2012-8-30 12:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢你了， 你的建议对我非常有用，消除了我的一些疑虑。不过我还想再次麻烦您，请您告知具体的试验方法，不胜感激，
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okhaha[使用道具]
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发表于 2012-8-30 12:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
转化的细胞分为无限细胞系和有限细胞系。无限细胞系又分永生化转化细胞系和恶性化转化细胞系（肿瘤）。永生化的B淋巴细胞属于一般永生化转化细胞系，如果是要建系的话，有些标准是要求达到的：1传代稳定。一般能传代50代以上的细胞系就可以是永生化细胞系。2遗传学特性稳定。传代20代以后的细胞需做核型分析鉴定是否还是正常核型。3恶性测试：如浸润实验、软琼脂培养、凝集试验、裸鼠致瘤实验等都要做的，看看永生化细胞是否恶性化，这些指标是最重要的！因为永生化细胞是正常细胞和恶性细胞的过渡阶段。4就是要做细胞的一般生物学特性的鉴定了：如生长曲线、细胞周期、倍增时间。。。这些指标都是要在传代20～30以后等细胞系稳定了才做的。我目前的细胞系养到了35代，上述指标已经做完，EB病毒转化的B淋巴细胞系基本上保持了原代B细胞的生物学特性，属一般永生化细胞系，没有恶性转化。
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okhaha[使用道具]
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发表于 2012-8-30 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
（补充）一般B淋巴永生化细胞生长迅速，倍增时间24h左右，3～4天即可传代，需要多少时间就自己算吧，呵呵！还是比较好养的！
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