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细胞消化下来仅仅是为了计数吗?
计数后的细胞还要不要?
如果仅仅是部分计数,其余的要继续培养的话
还是不要消化过久,免得对细胞造成损害
我们实验室的方法是
1. 吸干已长满培养单层细胞的细胞培养瓶中的培养液。
2. 加入PBS液冲洗2次。
3. 加入0.25%胰蛋白酶工作液(25ml培养瓶中加入约1ml;75ml培养瓶中加入2ml,24孔培养板约0.5ml),前后旋转培养瓶以便胰蛋白酶包被瓶内所有细胞。
4. 把细胞培养瓶盖松松拧上后置细胞培养瓶于37℃培养箱中。每隔半分钟将培养瓶拿出,用手猛拍培养瓶侧壁,使得瓶内的液体能带下将要脱壁的细胞。
5. 镜下检查细胞脱落情况,若无细胞脱落将培养瓶在放回培养箱中孵育,半分钟后拿出继续轻拍培养瓶,镜下观察见有大量细胞脱落时,即将胰蛋白酶工作液用吸量管吸出至事先加入胰酶中止液的离心管中,注意尽量不要让细胞成团絮状。
6. 在培养瓶中再加入2ml胰酶液,重复步骤3、4、5。镜下观察细胞,直至瓶内几乎没有细胞残余。
7. 将离心管置于4℃,1000rpm离心5分钟。
8. 弃上清液,在离心管中加入5ml培养液,轻轻吹吸,使细胞成均匀的细胞悬液,不要有肉眼可见的团絮状沉淀。
这样操作的优点是细胞不会成团,不管是对于计数还是对于传代继续培养都有好处