小中大我也做过一段时间的腺病毒转染试验。当时用腺病毒上清液只是用来转染293细胞,因为这种细胞能够为腺病毒提供扩增和包装的场所,所以对腺病毒上清液的滴度要求不高,但是加入的上清液的量比较多3-4ml/10ml培养基。这样培养56小时就能够见到强烈的荧光了。也试过用上清液转染HUVEC细胞的,但是上清液病毒滴度实在是太低了,而且细胞内不能提供腺病毒扩增和包装的必要条件(delta E3和delta E1区域),所以是很难看到荧光的,即使你的腺病毒构建和包装都没问题。所以,建议你看看,你的病毒是不是能在靶细胞中增殖包装,然后砸你决定是否用上清液转染。如果,不能的话,那就做病毒的纯化吧,虽然这个过程很烦,但是这样才能有效的提高转染成功率。