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标题:[求助]Triton X- 100

8princess8[使用道具]
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发表于 2012-8-31 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]Triton X- 100


我想作悬浮细胞内的GSH的测定，要先裂解细胞，可以用Triton X-100来裂解细胞吗，或有什么其他的方法，请指教。
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BOSS2011[使用道具]
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发表于 2012-8-31 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以，还可以用NP-40。
最简单的-80/37C 冻融一次就可以了。
我做过293细胞，CHO细胞都没有问题。
破碎结果镜检就可以了
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00无名指00[使用道具]
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发表于 2012-8-31 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
裂解细胞有好多种方法：
1、反复冻融法：-80度冻好，再拿到室温下融化，反复几次，这种方法无外来试剂的干扰，但需要硬件阿，超低温冰箱
2、皂化剂:
3、润湿剂：0.1%NP-40
4、碱性试剂：KOH溶液
5、Tris-HCL+Triton X-100+EDTA或单独0.1%Triton X-100
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BOSS2011[使用道具]
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发表于 2012-8-31 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

反复冻融，-20/37也可以阿，谁说一定要-80C。
渗透压破碎就行了，用不着碱。
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-8-31 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室没有负70冰箱，呵呵，还是先试试群友的方法吧/color]
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-8-31 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
对了还想请教反复冻融的时间呀
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BOSS2011[使用道具]
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发表于 2012-8-31 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

冻住就行了，每管体积不要太多，现可以用水做个预实验，我觉得50ml一管一个小时应该够了，我以前做的冻融一次应该就可以了，还可以用先离心，低渗溶液重悬后再冻，应该差不多。不要冻融次数太多了，蛋白会聚集的影响活性的。
好运！
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-8-31 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哪位大侠知道Triton X－100的使用浓度呀
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发表于 2012-8-31 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

0.1％即可破膜
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发表于 2012-8-31 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
朋友: 我想请教一下,triton x-100 有没有抑菌或者杀菌作用,如果加在pBS中溶解表达产物,对表达产物的活性是否有影响?
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