细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]细胞的离心速度

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]细胞的离心速度

33号[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74277
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4611
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-9
状态 离线
1

发表于 2012-8-31 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞的离心速度

我养的是淋巴细胞，离心时1500rpm，10min。有人说这样的离心速度太高了，对细胞不好。他们用的都是600~1000转，我用过1000转的，可离了10min管底什么也看不到，真是不敢吸去上清。还有师兄讲这样还可以去除浮在上面的死细胞，小妹我实在拿不准，请教给位战友，谢先。
顶部
wsll[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76794
精华 0
积分 423
帖子 505
信誉分 100
可用分 3393
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
2

发表于 2012-8-31 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我养的是淋巴瘤细胞,我们离心一般用1000转,5分钟,细胞基本上沉底,速度太快,离心时间太长,对细胞都会有损伤的.我们有时为去除细胞分解的物质时,用500-600转,5分钟,因细胞分解物质比较轻,低速离心沉淀不下来,而细胞一般比较重,可以沉淀下来,故去掉前者,但速度这么低的离心,会损失很多细胞,离心两三次后,就只剩下一半的细胞了.
楼主离心后管底不见细胞,会不会是细胞数目太少的缘故?我最少试过离心200000个细胞(1X10E5,1000转,5分钟),可以看到薄薄的一层沉淀.
顶部
rxcc33[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79965
精华 0
积分 633
帖子 885
信誉分 100
可用分 5303
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-18
状态 离线
3

发表于 2012-8-31 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果不放心可以这样，你用600~1000的速度离心细胞5分钟后，把上清倒回培养瓶里在显微镜下观察，如果里面有很多状态好的细胞那么就把离心速度提高一点，可以多试几次，找出比较合适的离心速度来。离心时间过长确实对细胞不好。你师兄讲得是有道理的。
顶部
wood533[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76132
精华 0
积分 863
帖子 1385
信誉分 100
可用分 7745
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
4

发表于 2012-8-31 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，按照ＦＩＣＯＬ分离液说明书上说的，１５００转／分，２０分钟，但是单个核细胞层的界限不清楚，呈雾状，而且提出细胞离心后也有很多杂质，我该怎么办？
顶部
qqq111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73201
精华 0
积分 830
帖子 1238
信誉分 101
可用分 7086
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
5

发表于 2012-8-31 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有一点不得不注意：你们实验室的离心机转数够不够，我们实验室的离心机的显示转数就比实际转数少的多，要反复试验确定适合自己的最佳转数。
顶部
xyw5[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75137
精华 1
积分 620
帖子 815
信誉分 102
可用分 4991
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
6

发表于 2012-8-31 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1。1500rpm/min 5min
2。参照免疫学常用实验方法[9]分离人外周血单个核白细胞。将白细胞混悬液用等倍体积的PBS稀释后，缓缓沿离心管壁加至淋巴细胞分离液上，用水平离心机以2000r/min离心30min后
3。这个方面我师兄很有经验，他一般用的转速一般是看文献得来得，而以上两个数据是他试验记录得一部分，鉴于不是我自己写得，我只能给你看看数据，他做的时候我在旁边，他取得是1500rmp/min,5min,离心速度快，则时间缩短，所以我建议你取第一个值，
4。离心得速度太高，就像是细胞培养时传代以后你会看到很多得细胞碎片，所以离心分钟数或是离心得速度太高都会使细胞大伤元气得，所以在离心分钟数和离心速度之间你取其一吧，如果离心效果不好你可以适当得延长时间，多离一两次，不要超过三次，切记
顶部
eric930[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79368
精华 0
积分 722
帖子 1061
信誉分 101
可用分 6148
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
7

发表于 2012-8-31 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不同品牌离心机的半径都不太一样，用转速来进行讨论好象不太准确。
一般用 ？g 来表示 。
顶部
zranqi_1[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77471
精华 0
积分 409
帖子 497
信誉分 100
可用分 3298
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
8

发表于 2012-8-31 17:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
同意楼上的，不光不同品牌的离心机，不同转头的也不同，我分别在1.5ml,15ml,50ml不同的离心转头上离过心，的确差别很大。我是做植物的花粉小孢子细胞，paper 上推荐使用450g，4min. 但是在实际的实验中我只用了160g，4min就可以把细胞完全离心下来了，尽管如此，对细胞还是有很大的损伤。建议多做几次预实验，做梯度离心，注意每次都要镜检上清，以确认没有细胞损失。
顶部
yychen[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77452
精华 0
积分 516
帖子 751
信誉分 100
可用分 4495
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
9

发表于 2012-8-31 17:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们离细胞一般是不高于3000转/分钟,5---10分钟,效果很好!!!
顶部
langlang[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77033
精华 0
积分 668
帖子 976
信誉分 100
可用分 5741
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
10

发表于 2012-8-31 17:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
离心细胞不仅与离心机的品牌转头有关，我认为不同的细胞其承受能力应该也是不同的，传代细胞往往比原代细胞承受力更大一些，但是细胞要离心下来需要1000-1500rpm/min,5-8分钟，这个数据是我做原代细胞得出来的经验。yancy_hgs 楼主说的是，应该不断摸索，总有适应于自己细胞的离心条件。
顶部