细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]请各位帮助鉴定一下这是什么污染!

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:[求助]请各位帮助鉴定一下这是什么污染!

fsdd817[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78590
精华 1
积分 590
帖子 795
信誉分 102
可用分 4841
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-30
状态 离线
1
 

[求助]请各位帮助鉴定一下这是什么污染!

我养的是K562细胞,上次也出现类似的污染,问其他人有的说是细胞碎片,可是却越来越多!这次又出现了,晕死啦!这些污染物与细胞可以共存,但细胞数也不会快速减少!
请大家帮助鉴定一下!多谢了

附图:


查看积分策略说明
附件
2012-9-1 14:07
58345502.jpg (8.41 KB)
 
顶部
fsdd817[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78590
精华 1
积分 590
帖子 795
信誉分 102
可用分 4841
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-30
状态 离线
2
 
再来一张!


查看积分策略说明
附件
2012-9-1 14:09
86686238.jpg (6.17 KB)
 
顶部
fsdd817[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78590
精华 1
积分 590
帖子 795
信誉分 102
可用分 4841
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-30
状态 离线
3
 

不是很清晰,不好意思!
不知道各位有否遇到过同样的现象!
顶部
zsxan1990[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76272
精华 0
积分 442
帖子 604
信誉分 100
可用分 3776
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态 离线
4
 

如果培养基颜色基本不变或变色较慢的话(48H),应该是真菌的污染;

如果在48H内颜色改变,或这些东西变得快速增多,应该是细菌的污染,只是这是生长不那么快的细菌。

可将培养皿放在1000倍镜下,观察这些东西有无活动,如有活动,细菌肯定了。然后用血平板培养进行药敏试验。确定敏感抗生素。

如不活动,继续。

将这些培养基离心涂片,革兰氏染色,油镜下观察,是细胞碎片还是细菌、真菌就非常清楚了。

但是,这肯定是污染!!!!!!!

我硕士是做微生物的,博士曾进行过一段时间的细胞培养,开始也曾因为不清楚吃过很大的亏。

如果以上你都不想做,又想让您老的细胞活下去,办法是:

1 将培养基离心收集沉淀 ,不完全DMEM或1640重悬,然后用密度梯度离心法取细胞层,反复洗涤后,再加上泰能和二性霉素B,注后者毒性较大,量不要过头了。再注,我是临床医生,给出这个建议是基于许多细胞培养防污染的文章和自己经验而来的。

2 如果这些您都不想做,那就送到我这儿来吧。不过,适当收点费,意思意思。因为不是我亲自做,还有我没有不收费就检查的权利。。。
顶部
fsdd817[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78590
精华 1
积分 590
帖子 795
信誉分 102
可用分 4841
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-30
状态 离线
5
 

非常感谢!
那是否可以排除是细胞碎片的可能呢?
顶部
zsxan1990[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76272
精华 0
积分 442
帖子 604
信誉分 100
可用分 3776
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态 离线
6
 

99%能排除!
顶部
S6044[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75117
精华 0
积分 559
帖子 797
信誉分 100
可用分 4821
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
7
 

从第二张图上看,确实像霉菌
PS:zhoujueyu主任能否把放大倍数说一下
顶部
fsdd817[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78590
精华 1
积分 590
帖子 795
信誉分 102
可用分 4841
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-30
状态 离线
8
 

第二张图是放大200倍的图!
顶部
gmjghh[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75184
精华 0
积分 475
帖子 589
信誉分 100
可用分 3823
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
9
 
我现在培养293细胞出现了问题,在细胞长满之前细胞状态很好,生长很快(单纯传代,未感染病毒),但长满之后一天就出病变,第二天病变十分明显,并且细胞脱落,无荧光表现;感染和对照之间也是同样的问题,感染的病变出得还没有对照快,但对照一直未出现荧光,感染有荧光表现,有老师说是支原体污染,还未经查证,您做过293细胞吗?请问是什么问题?现实验已暂停,急等回复!
顶部
zsxan1990[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76272
精华 0
积分 442
帖子 604
信誉分 100
可用分 3776
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态 离线
10
 

我不清楚您 所谓的荧光表现是什么。

293细胞我做过,还可以,不是特别难的。

比较关键的步骤是:

1 293细胞要在70%左右就传代,如果传代太晚,再传代,细胞状态就太老,活力下降的。

2 培养基最好用DMEM。注意细胞生长环境。

因不清楚你的思路,若还有问题,请见PM。
顶部