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标题:[求助]谷氨酸在损伤神经元模型中配制？

guagua[使用道具]
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发表于 2012-9-1 14:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]谷氨酸在损伤神经元模型中配制？


我用的是去离子水配成50mM的储备液，4度保存，做损伤模型的时候是直接加入到无血清培养基中至2mM，结果发现效果不明显，是什么原因呢？
另外我作激光共聚焦，观察加入谷氨酸后细胞游离钙的变化，我是用细胞外液稀释，细胞也是在细胞外液中在激光共聚焦下观察，但是最近2次发现加入谷氨酸后，无明显变化，是不是谷氨酸时间长了失效了？
紧急求助，谢谢先！
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ha111[使用道具]
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发表于 2012-9-1 14:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在也在做谷氨酸损伤PC12细胞造成钙超载模型.我是用无Mg-Earles 液配制谷氨酸溶液.谷氨酸造成细胞钙超载主要通过两条途径:细胞内钙释放增多和细胞外钙内流增多.无Mg-Earles 液含有钙离子,谷氨酸造成细胞损伤后可使细胞外钙离子内流.另外,浓度为2mM好象太低,我现在使用浓度为350 mM.(不过,我使用的谷氨酸钠已过期,不知是否会影响浓度)
关于无Mg-Earles 液的配制有好几种,我介绍其中一种,供参考:
甲液:Nacl 6.80g
Kcl 0.4g
NaH2PO4 0.125g
NaHCO3 2.2g
Glu 1.0g
双蒸水 600ml
乙液:
CaCl2 0.2g
双蒸水 100ml
甲液与乙液混合,加入溶有0.02g酚红的双蒸水100ml,调至1000 ml.
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DDD[使用道具]
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发表于 2012-9-1 15:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我最近也在做这个模型

但是为什么用谷氨酸钠造模没有浓度依赖性呢?

不同浓度的抑制率都差不多啊

而且高浓度的抑制率还有上升趋势
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guagua[使用道具]
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发表于 2012-9-1 15:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位的回复!
l楼上,你说2mM浓度太低,但是我看了好多文献上给的浓度比这个还要低,另外,你的浓度也太高了吧?
还有我用的是Sigma的单纯的谷氨酸,不是谷氨酸钠.我想这应该有区别吧?
无Mg-Earles 液来配制,是不是因为镁能够抑制谷氨酸的作用?
谢谢!
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发表于 2012-9-1 15:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我不懂损伤模型，但是我也做谷氨酸的，我是加到细胞中的，直接用培养液配制的。
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发表于 2012-9-1 15:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哦,谢谢你的回复!我想问一下,你是不是现配现用吗?还有你这样配的谷氨酸对细胞有没有毒性作用呢?
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2012-9-1 15:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我基本上是现用现配的，对细胞的毒性作用目前还没有发现，说句实话，我也不知道该怎样检测它对细胞的毒性作用，不知能否给我些指点呢！
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发表于 2012-9-1 15:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

昨天下午2:30配的0.1mol/L浓度的谷氨酸,按照我们科的的"国内最权威"的杂志上说的,溶于人工外淋巴液,用磁力搅拌器搅了一下午,还有少量没有溶解,因为我在公共试验室做实验,他们下午5:30下班,放置于常温,今天早上不得以放置于37度水浴(水浴一段时间,然后拿出来再搅拌,就这样折腾到了下午2:30.),发现完全溶解了,不知道效果怎么样?
我是想观察谷氨酸对神经细胞的兴奋性作用!不知道你的目的是什么?
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2012-9-1 15:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的是谷氨酸对成骨细胞的影响,不过我不用这么大的浓度的,我最多用到200umol/l，直接配在培养液里，超滤后加进去，所以好象挺容易溶解的，因为本来浓度就不高嘛．呵呵！
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发表于 2012-9-1 15:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也在做PC12的谷氨酸损伤的模型,我是这样做的:
首先摸了一下浓度的条件,我用的是10mM比较好,细胞损伤明显且不会死,每种PC12的条件都不一样,我们的主要是用的比较久了,有一点耐受了,低浓度不能造成明显的损伤.只有用这么高的浓度的.如果浓度梯度不是很大,细胞损伤确实没有什么浓度依赖性,我是直接加到96孔板和24孔板里的,所以用的是低糖的DMEM来配制的,具体如下:
1.称好一定量的谷氨酸,加入低糖DMEM
2.振摇,变成黄色,其中还有一些固体不溶
3.加入NaoH使之完全溶解,注意这个过程一定要振摇充分
4.调PH至7.2左右.
5.过滤.
注意我加的其实是谷氨酸钠.
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