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标题:[求助]我的DMEM PH 升高了

mysmdbl[使用道具]
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发表于 2012-9-1 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]我的DMEM PH 升高了


各位高手,我的DMEM加了3.7g碳酸氢纳,PH7.18,放在零下20度,现在变成8.0了,细胞只有一部分活了,我该怎么办,我没有加hepes,谢谢大家
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kulee[使用道具]
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发表于 2012-9-1 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以通过逐滴的加入0.1mmol的HCL来调节 还有也可以通过向培养液注入经过滤的二氧化碳
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2012-9-1 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

培养液中添加的碳酸氢纳在5%二氧化碳的环境中与碳酸形成缓冲对，其缓冲作用远大于磷酸缓冲对。
因此培养液的pH值必须以在5%二氧化碳的环境中平衡后的测定值为准，假如偏高或低，再用盐酸或氢氧化钠调节，温度会影响pH值，没关系，因为使用环境是37度。假如没有二氧化碳培养箱，最好加HEPES后密闭培养。
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mysmdbl[使用道具]
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发表于 2012-9-1 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的是在配时为7.18，然后保存在－20度，过了两周拿出来就变成8.0了．怎么用二氧化碳平衡，我们是在培养时才放入的，未过滤前，放入，怕污染．用盐酸调怕不准确
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milkdog[使用道具]
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发表于 2012-9-1 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
温度不同时，ph也不太一样！
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orangecake[使用道具]
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发表于 2012-9-1 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你养的是什么细胞?我养成纤维细胞,配液时根本就不用调PH值,且细胞本身就有一定的调节能力,其分泌产物会使培养液变酸,所以,我认为细胞不活可能并不是PH值的原因.
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发表于 2012-9-1 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的培养基可以不在-20度冻存，-4度避光保存一个月，使用是没有问题的。培养基配制后不宜-20保存，许多物质经过多次冻融后会发生变化，培养基加如血清后就更不能多次冻融
我觉的你的培养基不仅是PH变化，成分已经变了，重配吧
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发表于 2012-9-1 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同意楼上 的观点
而且我上次配的DMEM在-20度冻存后拿出溶解就出现大量沉淀
后来问有经验的老师
说DMEM是不能冻起来的
沉淀中都是养分
养分没有了
细胞当然长不好了
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 小中大

DMEM加了3.7g碳酸氢纳后还要加入HEPES。另外5%二氧化碳培养环境也很重要。
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伊莎贝拉[使用道具]
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 小中大

我养心肌细胞，不调PH就死翘了
配好的液体过几天就上升了，用HCL调可以吗，浓HCL没办法过滤，就直接加没过滤的可以吗？我的DMEM加了HEPES也没用，PH照样上升
胰酶可以加HEPES吗
请高手指点
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