[求助]乳鼠心肌细胞培养，多聚赖氨酸如何涂布？

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标题:[求助]乳鼠心肌细胞培养，多聚赖氨酸如何涂布？

any333[使用道具]
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发表于 2012-9-1 17:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

资料：多聚赖氨酸溶液（Poly-L-Lysine Solution）　 Conc.: 0.1% w/v, in water Storage: 18-26℃
Thimerosal, 0.01%, added as preservative 多聚赖氨酸溶液是广泛应用的组织切片与玻片黏合剂，该多聚阳离子分子与组织切片上的阴离子相互作用会产生较强的黏合力。
适用组织学，免疫组织化学，冰冻切片，细胞涂片，原位杂交等使用的玻片的防脱片处理，以防实验操作过程中组织掉片。也可用于细胞培养，增加细胞贴壁能力。

[使用说明]
免疫学
操作步骤（可直接在玻片上涂布）
1．灭菌的ddH2O 1:10稀释该多聚赖氨酸溶液。
2．用之前将稀释的多聚赖氨酸溶液放在室内，使其温度到室温18-26℃
3．将玻片浸在稀释的多聚赖氨酸溶液5分钟。注意增加时间不会提高包被效果。
4．在60℃烘箱1小时干燥，或室温18-26℃过夜干燥待用

我现在准备做乳鼠心肌细胞培养，可以按照上面的方法做吗？另培养板上如何涂布？望大侠们赐教！谢谢！

bohe221[使用道具]
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发表于 2012-9-1 17:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以参照我的方法，按照此方法应该不会有问题：

1，配制硼酸缓冲液：0.858g 硼砂＋0.68g硼酸＋100ml水，加热溶解后，过滤除菌；4度保存；

2，多聚-L-赖氨酸（分子量为15－30万）10mg＋0.858g 硼砂＋0.68g硼酸＋100ml水，过滤除菌，分装至EP管，每管1ML；－20度保存；

3，使用时，取一份2＋三份1，混合即可使用；

4，只要是培养板或者培养皿底部能被溶液完全包被即可。一般一个直径6cm培养皿铺2ml上述3混合液即可，可以室温包被过夜，或者室温6h；

5，在接种细胞之前，要用灭菌水洗3次＋灭菌PBS洗一次，注意洗液的量一定要大于包被液的量，接下来即可接种细胞

xevin[使用道具]
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发表于 2012-9-1 17:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果是培养到塑料培养板上不用涂布促进贴壁的基质。
如果要培养到盖玻片上，则应该处理好玻片，并包被明胶之类的促贴壁基质。
包被的方法，可以采用明胶的，本版有很多相关论述，你可以去搜索一下。
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=3474894&sty=3&keywords=%C3%F7%BD%BA')

参考一下吧。

另外，得弄清楚你的实验目的以及接种目的培养器皿的关系。

kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2012-9-1 17:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

“乳鼠心肌细胞培养”我查了不少资料（包括园内），但是我的课题指导根本找不到人，以前做的师兄们现在也早已毕业，所以什么都要自己去摸，是个菜菜鸟，呵呵！所以提的问题非常菜！但是这些细节上的问题，对我来说就非常重要，有些是资料上根本找不到的。

资料上说明胶配制时很难溶，所以我想用多聚赖氨酸，但多聚赖氨酸有一定毒性作用，青衫斑竹你觉得做心肌细胞培养，用那种比较好？

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-9-1 17:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

呵呵，我那个帖子有说过怎么配制的啊，得高压的。

另外，我觉得还是明胶好用一些，因为明胶的主要成分是I型胶原，参与细胞外基质的组成。
另外，我也提到了，你是要把细胞种植到玻片上，还是塑料培养器皿上。
如果是玻片上，应该用明胶一类的东西包被；如果是塑料培养器皿上，不需要包被，心肌细胞贴壁很好的。
心肌细胞的培养，关键在于消化，还有就是去除杂质细胞包括内皮细胞和成纤维细胞。

BUK[使用道具]
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发表于 2012-9-1 17:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们实验室培养的时候是植块培养，收集到的细胞长的不错啊，而且蛮好长的，没有用明胶铺过

04906[使用道具]
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发表于 2012-9-1 17:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我怎么觉得我的方法好简单呢？
1：在小烧杯中用去离子水1：10稀释多聚-L-赖氨酸
2：直接将盖玻片扔到此烧杯中1～2分钟
3：高压灭菌，烘干直接使用（不用冲洗盖玻片）
这样处理后的盖玻片我用来贴乳鼠心肌和骨髓干细胞都没有问题

yysr238[使用道具]
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发表于 2012-9-1 17:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我目前在培养原代神经细胞，培养板必须包被PLL，效果不错，方法供你参考。
Sigma公司的PLL（分子量30000-70000），用0.1M硼酸 /NaOH缓冲液PH8.4 （高压灭菌）做100倍稀释成200μg/ml应用液，0.22μm滤膜过滤。PLL滴加于培养板上，室温过夜。次日吸去PLL（可回收），双蒸水洗两遍，超净台中紫外线下风机吹干即可。

vivian4123[使用道具]
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发表于 2012-9-1 17:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢楼上战友们的帮助
另楼上战友培养原代神经细胞，佩服佩服！
今天在消毒东东，多方打听，我们这另一实验室，有位师兄传经：
室温过夜的话，有时细胞不贴，总的效果都不好，他都是直接拿到酒精灯上烤的，有时烤黑的也用，他说这样效果不错，真是不可思意，望有经验的战友赐教！

831226[使用道具]
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发表于 2012-9-1 17:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用向你介绍的方法，细胞贴壁都很好，在培养板和玻片上都可以。有时来不及过夜，在培养箱中放30分钟，再洗去吹干，细胞贴壁也很好。而未包被的培养板，神经细胞是肯定贴不上的。心肌细胞不妨用这个方法试试。群友的方法和我的差不多，但PLL的分子量不同。具体用什么分子量，请自己试一下。