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标题:[分享帖]smallcrystal的实验

owanaka[使用道具]
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[分享帖]smallcrystal的实验


不是很明白,为什么刚好96孔?
(空白+溶剂组X3+药物组X6)X n(重复孔数)=?
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911[使用道具]
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1、(530、490、530/690三组波长)。波长写错了吧?
2、摇床摇30min,太长了吧,用振荡器就可以,5-10min。
3、加几个孔就吹打细胞8-10次,晕,太过于小心啦,吹泡泡多了也不好啊。
4、把板子扣在卫生纸上即可,注意力度不要太大。
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tangxin_80[使用道具]
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呵呵,好像是是三个空白吧,一个是只有培养液,一个是培养液加细胞,还有就是在溶剂组前重复了一列细胞空白,这样就是12×8了

————————

为了什么?
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eric930[使用道具]
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请问本底、空白对照、溶剂对照具体是怎么做的,我最近要做不太清楚
先谢谢大家
把方法步骤贴出来。也许有人能用的着

四唑盐(MTT)商品名为噻唑蓝,
四吐盐比色法的原理:活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物(formazan),并沉淀在细胞中,而死细胞没有这种功能。二甲亚砜(DMSO)能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物,溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。再用酶标仪测定OD值
MTT法简单快速、准确,广泛应用于新药筛选、细胞毒牲试
验、肿瘤放射敏感性实验等。

操作步骤
(1)单细胞悬液接种于96孔培养板;103-104细胞/孔,每孔培养基总量200微升(96孔培养板每孔容积370微升),37℃、5%
CO2培养箱中培养一段时间(根据实验目的决定培养时间)
(2)加入2毫克/毫升的MTT液(50微升/孔);继续培养3小时。
(3)吸出孔内培养液后,加入DMSO液(150微升/孔),将培养板置于微孔板扳荡器上振荡10分钟,使结晶物溶解。
(4)酶标仪检测各孔OD值(检测波长为570 nm)。记录结果,绘制细胞生长曲线
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一叶[使用道具]
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1、DMEM高糖的比低糖的要好一些,我养肿瘤细胞就发现这个现象。
2、不同细胞对血清要求不一样,不能一概而论,包括血清的产地,批次,国产血清在这方面不好。
3、细胞老在同一个瓶子里传代容易活性不好,可以换一新瓶试试。
4、消化后应及时用培养液中止,用吸管轻吹使均匀。
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loli[使用道具]
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用培养皿养很方便的,你可以试试!
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zzzz[使用道具]
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1、DMEM高糖的比低糖的要好一些,我养肿瘤细胞就发现这个现象。
2、不同细胞对血清要求不一样,不能一概而论,包括血清的产地,批次,国产血清在这方面不好。
3、细胞老在同一个瓶子里传代容易活性不好,可以换一新瓶试试。
4、消化后应及时用培养液中止,用吸管轻吹使均匀。

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原则上,肿瘤细胞用DMEM都要用高糖的,如果用低糖的,细胞状态会很差的。
正常细胞多用DMEM低糖的。
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DDD[使用道具]
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DMEM低糖的纯粹是垃圾培养基,个人看法,不如DMEM高糖和1640,用DMEM低糖养MDCK, NCI-H460, 293-T一般3天细胞全飘起来死掉,养COS-7, 95D,U251, MCF-7,SHG-44状态很差。我就上过这种当。当时没有1640,只好暂时凑合一下,没想到是这样。8988全称是Patu-8988,K-ras基因突变,国内有些文献报道说用低糖养养,不要太当真,养的好不好还是个问题,反正不好也能做实验,呵呵。
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fei1226com[使用道具]
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DMEM低糖的纯粹是垃圾培养基,个人看法,不如DMEM高糖和1640,用DMEM低糖养MDCK, NCI-H460, 293-T一般3天细胞全飘起来死掉,养COS-7, 95D,U251, MCF-7,SHG-44状态很差。我就上过这种当。当时没有1640,只好暂时凑合一下,没想到是这样。8988全称是Patu-8988,K-ras基因突变,国内有些文献报道说用低糖养养,不要太当真,养的好不好还是个问题,反正不好也能做实验,呵呵。

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不同的培养基适用于不同的细胞;不同的细胞需要不同的培养基。

我用DMEM低糖培养过多种正常细胞(成纤维细胞,多种内皮、心肌细胞),原代制备的HUVEC曾经培养到15代以上。

只是DMEM低糖确实不太适合大多数肿瘤细胞,这和肿瘤细胞的代谢机理相关。肿瘤细胞分裂活动旺盛,代谢快,且以糖代谢为主要能源,所以一般采用高糖的DMEM。当然,RPMI-1640是肿瘤细胞的大众培养基。
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zwsyrt[使用道具]
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DMEM低糖的纯粹是垃圾培养基,个人看法,不如DMEM高糖和1640,用DMEM低糖养MDCK, NCI-H460, 293-T一般3天细胞全飘起来死掉,养COS-7, 95D,U251, MCF-7,SHG-44状态很差。我就上过这种当。当时没有1640,只好暂时凑合一下,没想到是这样。8988全称是Patu-8988,K-ras基因突变,国内有些文献报道说用低糖养养,不要太当真,养的好不好还是个问题,反正不好也能做实验,呵呵。

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看来,您可以对生产低糖DMEM的厂家提起公诉了,哈哈!(开个玩笑)
我们养肝星状细胞的就是用低糖的
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