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标题:[讨论帖]SK-N-SH人神经母细胞瘤培养

tuuu2[使用道具]
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发表于 2012-9-3 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[讨论帖]SK-N-SH人神经母细胞瘤培养


购买了人神经母细胞瘤,下一步打算做转染,希望与大家分享经验
期望与曾经或现在养此细胞株的大侠交流交流


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2012-9-3 16:39
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tieshazhang[使用道具]
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发表于 2012-9-3 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

太高兴了，我今天买的SK-N-SH刚到，希望和您一起交流进步！
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发表于 2012-9-3 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

ATCC complete growth medium: Minimum essential medium (Eagle) with 2 mM L-glutamine and Earle's BSS adjusted to contain 1.5 g/L sodium bicarbonate, 0.1 mM non-essential amino acids, and 1.0 mM sodium pyruvate, 90%; fetal bovine serum, 10%

注解:The SK-N-SH line was developed by J.L. Biedler and differs from SK-N-MC (see ATCC HTB-10) in that it exhibits a longer doubling time and higher levels of dopamine - beta - hydroxylase. SK-N-SH has been used as a target cell line in cell mediated cytotoxicity assays.

在中医科细胞库购买,并用1640+10%胎牛血清培养.
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发表于 2012-9-3 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是atcc的的细胞图
因为还没来得及拍,所以先用这个用图.迟些补上
刚刚培养这个细胞株,会陆续补上对这细胞株的一些培养细节,重要不是得分,是为了和大家交流,谢谢版主提醒
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发表于 2012-9-3 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问搂住养这个细胞，长满后1传二扩瓶，几天能再长满？
（我养的是SH-SY5Y细胞，长得非常慢）
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发表于 2012-9-3 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用15%的血清,一般是1传三,四天左右再传代.
这株细胞比我之前养的癌细胞(T24)要慢,听老师说是神经性细胞的特性,下面是atcc的原话"The SK-N-SH line was developed by J.L. Biedler and differs from SK-N-MC (see ATCC HTB-10) in that it exhibits a longer doubling time and higher levels of dopamine - beta - hydroxylase.
SK-N-SH has been used as a target cell line in cell mediated cytotoxicity assays"
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发表于 2012-9-3 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们用的是DMEM培养基+10％血清，细胞长满后1传3，四天左右能再长满。提醒楼主的是这是一株永生化细胞但不是永恒不变的细胞，有的实验会受到传代次数的影响，我在做其钙应答反应的实验中就遇到了这个问题，结果随着细胞传代次数增加，药物的反应消失，文献建议用28代以前的。所以最好多冻存几管早期的细胞，有备无患！
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发表于 2012-9-3 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

感激，,细胞到达的时候似乎状态不太好,所以再传两代再做冻存
目前在养的T24已经传代30代了,形态和以前已经不太一样了,准备复苏一批.
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49888[使用道具]
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发表于 2012-9-3 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问，你买的SK细胞有代数的说明吗？我想重买株细胞结果问了几家细胞库都没有代数方面的说明，不知你在哪买的，买的时候有没有代数方面的说明
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发表于 2012-9-3 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我在养这种细胞的同时也遇到同样的问题
似乎细胞不如刚刚买到的时侯增殖的快了
而且药物干预似乎作用也不如以前明显了
很郁闷
因为在刚开始时没有冻存足够的细胞
我用的培养也是MEM10％牛血清
现在已经改为胎牛血清了
可是生长还是比较慢
形态似乎没有改变
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