细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]24孔板接种细胞时，只有周围的细胞能存活...

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 16  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]24孔板接种细胞时，只有周围的细胞能存活...

any333[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 76446
精华 1
积分 1533
帖子 2542
信誉分 102
可用分 13711
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
1

发表于 2012-9-3 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]24孔板接种细胞时，只有周围的细胞能存活...


很奇怪的现象
有没有人也碰到过这种现象呀？
顶部
dotaaa[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74170
精华 0
积分 461
帖子 621
信誉分 100
可用分 3880
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态 离线
2

发表于 2012-9-3 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的细胞是悬浮还是贴壁？我用24孔板养悬浮细胞也遇到过这种情况，中央的细胞密度明显大于周围的细胞密度，具体什么原因我也没搞清。
顶部
any333[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 76446
精华 1
积分 1533
帖子 2542
信誉分 102
可用分 13711
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
3

发表于 2012-9-3 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我养的是贴壁细胞呀？
郁闷死了
顶部
nn255[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76746
精华 0
积分 652
帖子 1024
信誉分 100
可用分 5877
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
4

发表于 2012-9-3 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

接种的细胞密度是多大？接种多长时间了？

24孔版，接种细胞是容易在中间聚集而使其密度增高。

解决的办法，接种的细胞密度可以降低。而且一定是把细胞密度调整好了再接种，不能先加细胞若干，再补加培养基到0.5-1.0毫升。
顶部
milkdog[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79280
精华 0
积分 500
帖子 719
信誉分 100
可用分 4366
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-9
状态 离线
5

发表于 2012-9-3 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该不是死，大部分圆形的培养板都会出现这样的情况，主要是张力问题，铺不均匀。孔越小越容易这样。

铺好板后不要马上移动，静止10－20分钟，等细胞贴壁了再移动。

如果铺的时候就已经不均匀了（可以在镜下观察），可以用手晃动板子，我一般习惯剧烈一点，幅度小一点，可不要把培养液晃出来。这样就不会铺不均了。

也可在细胞未完全贴壁的时候，用吸管把细胞再吹混一下。
顶部
TAT[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74236
精华 0
积分 507
帖子 694
信誉分 100
可用分 4298
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
6

发表于 2012-9-3 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在24孔板或6孔板等圆形培养皿中种细胞时，不要旋转振摇，而要前后或左右平行振摇，否则细胞会集中在孔的中央，造成密度不均匀。
同意楼上的，可以稍剧烈，小幅度，但一定得单向的，不能旋转。
顶部
qqq111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73201
精华 0
积分 830
帖子 1238
信誉分 101
可用分 7086
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
7

发表于 2012-9-3 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我在给24孔板细胞换液时碰到过，有一次做转染摸优化条件，发现每孔都是只有周边的细胞存活，而中间的细胞都死了，开始以为是转染操作时的问题，后来终于发现是换液时的问题，因为我是把所有孔的培养基都吸掉，在全部加上新鲜的培养基，估计是酒精灯离自己比较近，拿板子的时候高度和酒精灯的火焰差不多高，而超净台里的风将火焰向着自己的方向吹，所以我后来觉得是本来培养基就吸的比较干净，再加上吹过来热风，所以中间的细胞都干了，而周边多少还会残存一点没有吸彻底的培养基，所以周围的细胞会存活下来，在光镜下面看，周边的细胞基本形态正常，而中间的细胞就象只有一个空壳在那里，倒是也贴着壁，就是没有立体感。后来调整了酒精灯的位置，还有换液时可以一孔孔操作，速度快些，不要将细胞凉干了，就好了，我也是好几次才找到这个原因。
顶部
04906[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73544
精华 0
积分 599
帖子 858
信誉分 100
可用分 5155
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
8

发表于 2012-9-3 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果你是圆形底的，楼上战友的说法很正确。如果你是平底板，我想一个是接种密度，一个是接种时会不会不均匀？还有，你可以用多聚赖氨酸包被一下来改善，我以前也遇到过这种情况，包被后就好了！
顶部
kewanqi2011[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76114
精华 2
积分 534
帖子 660
信誉分 104
可用分 4146
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
9

发表于 2012-9-3 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同意楼上的意见，细胞培养时需要在载玻片包被附着物，否则细胞不能贴壁，因为贴附是细胞增殖生长的条件。常用的贴壁有胶原、多聚赖氨酸等。
顶部
ritou1985[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77664
精华 0
积分 644
帖子 948
信誉分 100
可用分 5596
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
10

发表于 2012-9-3 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我刚刚用24孔板接种也是这样的，容易聚到周围去。所以后来旧板子就铺上载玻片，点样在玻片上，提前铺敷多聚赖氨酸。新板子就直接种到中间，细胞悬液密度大一点，点液量少，尽量不晃动，这样也还比较均匀，但是需要贴壁后补液。
顶部
 16  1/2 12››