细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]细胞冻存

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 19  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]细胞冻存

october7[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77254
精华 0
积分 448
帖子 616
信誉分 100
可用分 3856
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
1

发表于 2012-9-4 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞冻存


细胞冻存时直接把血清，DMSO加到放有细胞的试管里，而不是先配好冻存液并预冷，这样会不会由于放热导致细胞死亡？这样冻存的细胞还能用吗？
顶部
hyuu[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79232
精华 1
积分 626
帖子 847
信誉分 102
可用分 5149
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-8
状态 离线
2

发表于 2012-9-4 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般来说问题不大。但是您要做好后面的工作，就是让分装好的冻存细胞逐渐降温：先将它放入－20度冰箱两小时，然后取出放入－80度冰箱内一天，再转入液氮内长期保存。
顶部
ritou1985[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77664
精华 0
积分 644
帖子 948
信誉分 100
可用分 5596
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
3

发表于 2012-9-4 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最好还是先一起都配好，4度预冷。然后可以用棉花多点包好，或用泡膜加起来，直接投到-80度就可以了。中间省了-20度或程序性降温仪。

我们试过了，冻淋巴细胞，20%FCS，10%DMSO，70%DMEM。两天后复苏，存活率达98.3%（用casy一起测定的）。
顶部
skytree[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76459
精华 0
积分 372
帖子 444
信誉分 100
可用分 3026
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
4

发表于 2012-9-4 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我分装的DMSO（用的是透明的玻璃瓶），一段时间后就变黄了，谁能告诉我是什么原因？
顶部
DDD[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73222
精华 1
积分 587
帖子 790
信誉分 102
可用分 4768
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
5

发表于 2012-9-4 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我分装的DMSO（用的是透明的玻璃瓶），一段时间后就变黄了，谁能告诉我是什么原因？

——————————————————————

DMSO要避光保存的，透明玻璃瓶不行呀。
顶部
831226[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79782
精华 0
积分 770
帖子 1240
信誉分 100
可用分 6976
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
6

发表于 2012-9-4 12:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我不小心将DMSO 放在4度了, 结果第二天就结冰了.请问溶解后还能用吗?
顶部
daod[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76758
精华 0
积分 585
帖子 790
信誉分 100
可用分 4891
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
7

发表于 2012-9-4 12:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

冻存液，最好先配好
DMSO预先过滤下
冻存时，按常规要求4度—— -20度—— -70度
我们在实验中经常是冻存管直接用棉花裹起来，放入-70度，完全可以
有条件的同志，可用冻存盒，里面装的是异丙醇（1度/min 梯度降温）
顶部
join[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72960
精华 0
积分 627
帖子 873
信誉分 100
可用分 5266
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
8

发表于 2012-9-4 12:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

老兄，你的操作可能会影响你的细胞保存质量，但是复苏以后细胞还是可以用的，不过细胞复活的数量可能要少的多，你要等着用的话会很急人的。
所以以后要注意啊！
顶部
wmp1234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79925
精华 0
积分 588
帖子 855
信誉分 100
可用分 5078
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
9

发表于 2012-9-4 12:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细胞冻存时直接把血清，DMSO加到放有细胞的试管里，而不是先配好冻存液并预冷，这样会不会由于放热导致细胞死亡？这样冻存的细胞还能用吗？

——————————————————————————————————————————

我们的做法是4度10分钟,-20度30分钟,-80度1天,液蛋终生.
有时经常在4度保存的时候忘记,第二天再复苏,细胞不行了.-80度放几个月都不成问题.
顶部
remenb[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75236
精华 0
积分 631
帖子 941
信誉分 100
可用分 5531
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
10

发表于 2012-9-4 12:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我取部分DMSO特意放在4度，想看看它结冰，可为什么没有结冰呢，是否性质发生变化，溶液倒还是无色透明。
顶部
 19  1/2 12››