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标题:[求助]细胞消化的问题

am10[使用道具]
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发表于 2012-9-5 12:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞消化的问题


消化细胞时，用枪反复吹打混匀是不是对细胞损伤很大？
用移液器混匀是否效果好一点啊？
多谢！
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小螺号[使用道具]
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发表于 2012-9-5 12:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你好，我不知道你养的是哪种细胞，我养的是HELA CELL。我认为，在消化时，对细胞损伤较大的是胰酶作用时间过长，用枪反复吹打混匀则对细胞的损伤并不大。相反，充分混匀，使细胞都成为单细胞更好。说到这，我的问题是，怎样能使细胞成为单个呢？哪位高人能指点一下？谢谢
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windy+++[使用道具]
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发表于 2012-9-5 12:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你好，我不知道你养的是哪种细胞，我养的是HELA CELL。我认为，在消化时，对细胞损伤较大的是胰酶作用时间过长，用枪反复吹打混匀则对细胞的损伤并不大。相反，充分混匀，使细胞都成为单细胞更好。说到这，我的问题是，怎样能使细胞成为单个呢？哪位高人能指点一下？谢谢
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 小中大

用枪反复吹打混匀对细胞损伤会很大,特别是小枪头.
所以我们都是用刻度吸管来缓缓吹打,而且只能用10毫升的吸管,因为它的口比较大,
不会把细胞挤伤.吹打是动作一定要轻柔,这样传的细胞状态较好.
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tieshazhang[使用道具]
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 小中大
胰酶中加少量的EDTA的方法是最好的，我们一般都能消化到单个细胞，最好不要吹打。一般是100ml胰酶加0.5M EDTA 250ul,你可以试试
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tieshazhang[使用道具]
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 小中大

不好意思，是200ML 胰酶加250ul EDTA
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yueban-1147[使用道具]
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 小中大

感觉EDTA对细胞的影响较大,如细胞不是很难消化,尽量不用EDTA.
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lixi559[使用道具]
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发表于 2012-9-5 12:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
:请问EDTA的浓度？
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newway[使用道具]
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发表于 2012-9-5 12:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胰酶－乙二胺四乙酸二钠（EDTA）
胰酶 2.5g
EDTA 0.2g
无钙镁缓冲液 1000ml 过滤除菌

无钙镁磷酸缓冲液：
NaCl 8.0g
KCl 0.2g
Na2HPO4(无水) 1.15g
KH2PO4 0.2g
去离子水 1000ml 高压灭菌
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owanaka[使用道具]
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 小中大

EDTA的浓度0.5mol/L
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