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标题:[求助]脑微血管内皮细胞的培养

vcve[使用道具]
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发表于 2012-9-5 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]脑微血管内皮细胞的培养


那位老师养过脑微血管内皮细胞？我刚开始培养遇上了一些困难，请帮忙分析以下：
1.微血管段在10倍倒置相差显微镜下是什么形态？我的怎么那么小，难确定。
2.微血管段用胶原酶消化后都是较为浑浊的吗?

由于非常着急，请多多帮忙，不盛感激！
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mickeylin[使用道具]
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发表于 2012-9-5 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

40倍镜下的图片。
胶原酶消化都是显示浑浊的一团物质。你用的是第几型的胶原酶啊？


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2012-9-5 13:15
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eric930[使用道具]
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发表于 2012-9-5 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教一下，图片中混杂的团块是什么，怎样除去呢，分离的血管片断是直接培养还是消化成单个内皮细胞后再养呢，有必要把混杂的细胞团都除干净吗？有的书上介绍右旋糖苷梯度离心有这个必要吗？谢谢赐教！
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发表于 2012-9-5 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

当时是经过80um的筛网过滤后冲洗80um网上的微血管后，团块会少一点，但是培养得到的微血管还是不够纯，所以现在加了一步percoll梯度离心，但是细胞经过这么多折磨，活力不好，正在改进，你有好建议可以交流一下。
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utt0989[使用道具]
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发表于 2012-9-5 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

与楼上的战友情况类似，分离的血管段很少，而且有很多团块混杂。有资料上介绍用右旋糖苷梯度离心分离，昨天试过，血管段沉不下来还是和那些细胞团块混在一起，不知道是哪里出了问题，请教lcfjeff战友，percoll是什么，你离心的效果好吗，希望能和你继续探讨共同做好分离工作！
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 小中大

微血管段在10倍的倒置相差显微镜下可以看得很清楚，短棍状，有时会有分支，将分离的血管片段直接培养，24h后就会看到有细胞爬出血管段，形态似蜈蚣样，反而如果是单个细胞无法成活。若要得到比较纯的微血管段，可以用percoll梯度离心，但是这样血管段的损失较多，甚至得不到血管段，建议初学者，可以省略这一步，用右旋糖苷离心（4500g，4度，20min）后用缓冲液离心洗两次后直接种植，这样得到的血管段比较多，到时候内皮细胞才能长成一片。
mengnalisha 战友你可以多看看文献，因为很多文献上都有微血管段和内皮细胞的图片，祝好运！推荐一篇：development and characterisation of a rat brain capillary endothelial culture:towards an in vitro blood-brain barrier.Journal of cell science103.23-37(1992).
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tieshazhang[使用道具]
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发表于 2012-9-5 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好,刚刚看到你的帖子,看来你是养脑内皮的高手,我最近养了两次,都是24h后还行,可再过一天就都不行,麻烦你帮我找找原因,谢谢!!
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mickeylin[使用道具]
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发表于 2012-9-5 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这位战友过奖啦，我也才是刚开始没多久，你的细胞在24h后是什么样的状况啊，说出来可以让同路人一起分析探讨。
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2012-9-5 13:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这么快就有消息了，太好了。

我的细胞在24h后，典型的血管段已经没有了，已经缩成一团贴壁了，而且周围似乎已有细胞向外生长（但不太明显），有一些梭形的胶质细胞贴壁生长，48h后大部分都漂起来了。郁闷！
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mickeylin[使用道具]
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发表于 2012-9-5 13:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
24h后血管段贴壁，有的部分裂解死掉了，血管段因为细胞爬出而变形了或缩成一团，在10倍倒置显微镜下观察可以清晰看到血管段周围的细胞，小小的似梭形的，一般在24h的时候没有杂细胞生长的，也许会有少量周细胞，所以你说的胶质细胞可能就是内皮细胞，至于48h后就漂起来了，一般是不会有这种情况的，你可以换液后再在显微镜观察看是什么情况，或者你的胶没有铺好或者是培养液的问题，都有可能的。
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