小中大[求助]关于MTT
急问:昨天做完我的MTT实验．结果让我十分沮丧，前来求助．
过程是这样的：L929细胞株制作10*106／ml的细胞悬液，加入三块９６孔板中，培养４８小时后，加入五种材料浸提液继续培养，分别于第１，３，５天取出加入MTT，三小时后加DMSO震荡十分钟，在酶标仪下检测其OD值．
１．我用的是中科院细胞所购买的L929细胞株，他们说这是永生化细胞．培养到第十代时开始做．
２．材料试件是在材料学院做的，是一个与外界完全相通的空间，没有特别的隔离设施，但在做实验前用紫外线消毒过，每个面４小时．
３．材料中有一种是证实细胞毒性二级 ，有两种是临床已广泛使用的材料（一种国产一种进口）应该是细胞毒性在一级以下。阴性对照组为只加细胞培养液。
4. 在加MTT前先用倒置相差显微镜摄影．
结果：
od值结果与镜下的结果几乎完全相反。镜下细胞生长良好分布密度高的测得od值低，镜下细胞稀疏或是形态异常细胞较多时od值反而高。附图示自研材料测得od值低，进口材料测得od值高。阴性对照od值比样本的od值均要低，甚至低于细胞毒性二级的材料 。在染色时就发现镜下细胞长得好的组染色很浅，觉得看上去不太顺眼的染色反而很深。
因为是初次做实验没有经验，请问各位高人在做实验初期有没有碰到过类似情况，或者指点一下哪个环节出错以至出现这样相反的结果呢?
