液相色谱

还是继续悠悠白云之前的帖子，如前所述。
后来新配的样品的色谱图与之前配的大不相同，但是之前配好的样品是稳定的，色谱图基本没有变化。于是怀疑之前的引入了杂质，又新配样品，熟料三张图都不相同，又新配样品，还是不同，请教各位大侠指点迷津！感激不尽！
http://bbs.antpedia.com/viewthread.php?tid=14559[

[ 本帖最后由 悠悠白云 于 2009-7-9 16:43 编辑 ]

难道是新配好的样品溶液还未达到构相上的平衡造成的（我没做过蛋白类的样品，还真没见过这种情况），放置一定时间后再测看看。
有问题的人是幸福的，今天的问题将是明天的财富，我很看好你噢！

“三张图都不相同”是怎么个不同法？保留时间还是相对含量？如果是相对含量有波动，看样品是不是颗粒较大的固块，考虑一下是不是没有混合均匀而引起的取样没有代表性。如果是保留时间出现不一致，那就要考虑样品还是不是同一个了！

[ 本帖最后由 j-1982 于 2009-7-8 10:30 编辑 ]

谢谢你的热心帮助！是色谱峰个数不同。除了死时间出一个大峰（峰高和峰形也不同），后面的几个峰一点重复性没有，有的有四个峰，有的只有一个峰。样品可以肯定是同一个样品。样品是用mp三氟乙酸水溶液和乙腈（20/80）配制的。流动相也在进样瓶中配了几次，没有出峰。

不过一个多月来总是遇到问题了，以前从没与遇到过如此棘手的问题，现在有点灰心了。不过，谢谢你的鼓励！
样品放置后没有变化，做这个项目之前就已经知道很难分开，没想到是如此之难，问题层出不穷。
我想把图传上去，还不知道怎么传，我再研究一下。

你的三张所谓都不同的图我看到了。我的第一印象是这三张图并没有什么本质的不同，尤其是第二张和第三张，主要是浓度或进样量的不同。第一张看似主峰分了叉，实则可能是与其他两个平衡状态不一样造成的。这三张图保留时间太短了，要想分离首先要让样品在柱上有保留，即（反相柱）应该增大流动相的极性。如始终无保留，建议加碱试试，仍无保留，换柱子。
再次强调，第一张图的分叉并不代表你已经将混合物分开了。严格地讲，对于主峰，这三张图均无任何意义，均不能说明任何问题。
另外，不要把所谓的似乎是杂质峰的峰太当个什么悬疑，请先抓住主要矛盾，解决了主要矛盾，细枝末叶也就迎刃而解。

[ 本帖最后由 j-1982 于 2009-7-14 13:25 编辑 ]

谢谢您的关注！
我知道死时间的峰没有意义，我们只是想先分开来看大致有多少种组分。标准品还没有到货。样品是自己合成的，还不知道主峰是不是目标峰呢。我也想让主峰有保留，但是根据目标组分的性质，试了很多流动相都不管用，要不就是不出峰，要不就是死时间出峰，为什么没有一个合适的时间出呢？梯度也走了很多，不是没有重复性，就是跟空白梯度一摸一样。我做液相也有几年了，没遇到过这种情况。
三张图的样品的批次，浓度和进样量都是相同的，只是不同次配制的。