小中大[求助]原代星型胶质细胞培养
小弟这学期开始培养原代星型胶质细胞，但总是培养不好，郁闷的就差跳楼了。望各位高手指点，万分感激！下面是我的基本步骤。
生后72h内小鼠12只，无菌取全脑，置于预冰的D－Hanks液中，剪碎室温静置5min。0.125%胰酶、37℃消化15min。20％FCS－DMEM终止消化，1500r/min离心5min，弃去上清含酶液，重复一次。过200目钢丝筛，制成5％FCS的初细胞悬液，接种至容积250ml玻璃培养瓶，差速粘附50分钟去除纤维细胞成分。1500r/min离心5min，浓缩成2ml的次细胞悬液。用20％FCS-DMEM稀释为5×10exp5个/ml，接种l铺有明胶的培养瓶。培养72h，用20％FCS-DMEM培养液换液一次，之后每3－4d用10％FCS-DMEM培养液换液，至细胞长满。细胞融合成片后，接种传代（约10天）。传代时胰酶消化后，镜下观察，机械吹打。
