小中大[求助]原代大鼠皮层神经元培养为什么总活不过4天
我这个学期开始做大鼠原代神经元培养，折腾了两个多月了都还不成功：现在做原代基本能够获得活性比较好的细胞，贴壁觉得也还可以，前两天细胞状态也不错，但从3d开始细胞开始出现死亡，第4天基本死光光了。换不换液或半量、1/3换液都死亡。百思不得其解，求助各位高手出手相救！
我的原代培养方法：E17天大鼠胎鼠，解剖液无酚红D-HANKS液（方便拨离脑膜, 冰上操作），0.125％胰酶消化10分钟左右，加小牛血清至10％终止消化，弃去消化液，加新鲜D-HANKS液，用大口光滑的枪头（前端剪去一段后火焰上烧过）轻轻吹打10次左右，取上清到离心管静置，重复3次。静置几分钟后吸取中上层的悬液，800转离心5分钟，重悬后计数接种，96孔板接种密度5万/孔/100ul。
我的培养液配方：
1、高糖DMEM（GIBICO）＋ 10%胎牛（四季青）
2、高糖DMEM（GIBICO）＋0.5mM L-谷胺酰胺＋2.5uM 谷氨酸钠 ＋ 10%胎牛（四季青）
3、高糖DMEM：Neuronbasal 1：1 或 加2％ B27
96孔板处理方法：PLL（SIGMA）100ug/ml 100ul/孔孵育30分钟，晾干后紫外照30分钟。
换液方案：48小时后全量或半量换液，几种培养都差不多死了，没换过液的液死了。
真的是找不到原因啊！做了五六次了，太郁闷了，请各位高手支支招！！
附24小时后照片
