[求助]肝星状细胞

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标题:[求助]肝星状细胞

guagua[使用道具]
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发表于 2012-9-8 12:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我刚分离的肝星状细胞,两天后还是圆形的,仅有几个细胞转变成星型,细胞数量较少,不知大约多长时间多数细胞才能转变星型

TNT[使用道具]
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发表于 2012-9-8 12:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你分离的纯度不是很高，我硕士分离时三四天就转变成星型，你肯定分离的纯度不够，参有肝细胞，内皮细胞或肝窦状细胞。建议你纯化。

guagua[使用道具]
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发表于 2012-9-8 12:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我分离的原代细胞近30小时换液，换液后细胞剩余不多，现在快72小时了，还可以见到细胞在不断的死亡，多数细胞还是圆形，有一些细胞转变成星形，较少，郁闷呀！

abc816[使用道具]
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发表于 2012-9-8 12:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

原代分离的肝星状细胞我们看到的是4天左右可以看到细胞生长，完全星形要7天后。当然细胞生长与细胞接种密度有关的，所以你的细胞可能活力不够或是密度纯度不够。分这个细胞难度还是比较大的。慢慢来吧！

is2011[使用道具]
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发表于 2012-9-8 12:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我分离的大鼠的7-10天可以传代

wu11998866[使用道具]
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发表于 2012-9-8 12:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你的纯度不高啊，你重新改进方法，3天左右就伸出伪足，呈现星状。你可能是肝细胞较多。我硕士在上海分离此种细胞有10多次，也没有遇到你这种现象。我的纯度在90%以上。

guagua[使用道具]
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发表于 2012-9-8 12:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我才第二次分离此种细胞，就出现这种情况，现在细胞被我扔掉了，原来有的转变成星形的也不见了，大概死亡了，干脆扔掉。我不知如何纯化，实验室条件有限，台盼蓝也没有，荧光显微镜（奥林巴丝）不知怎么调波长，只知道有兰色和绿色两种荧光，无法观察分离后是否有肝星状细胞，仔细考虑一下，有几种原因：
无血清培养基PH值粗测为7.0（加血清后未测）不知是否有影响；
血清培养基用的是10%FBS，30小时换液后近三天未换液，观察细胞状态不好，就扔掉了；
细胞密度不够，第一次分离出细胞，接种到一个培养瓶，发现细胞特别多，就接种到四个培养瓶，大概混杂细胞也特别多；
实验室冷冻离心机坏掉了，只能到楼上离心，而且只能3600转，设定30分钟，见少数离心管中切实有白色膜层，吸取后，无法鉴定，想养一下看一下免疫组化鉴定；
请大家多多指教！

qumm1985[使用道具]
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发表于 2012-9-8 12:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 guagua 于 2012-9-8 12:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我才第二次分离此种细胞，就出现这种情况，现在细胞被我扔掉了，原来有的转变成星形的也不见了，大概死亡了，干脆扔掉。我不知如何纯化，实验室条件有限，台盼蓝也没有，荧光显微镜（奥林巴丝）不知怎么调波长，只知道有兰色和绿色两种荧 ...

您没有进行纯化啊？

guagua[使用道具]
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发表于 2012-9-8 12:50 资料个人空间短消息加为好友

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原帖由 qumm1985 于 2012-9-8 12:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

您没有进行纯化啊？

怎么纯化？

qumm1985[使用道具]
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发表于 2012-9-8 12:51 资料个人空间短消息加为好友

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原帖由 guagua 于 2012-9-8 12:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

怎么纯化？

请搜索一下关于HSC分离的帖子

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